特別提示:包括Bradford蛋白定量試劑盒在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:Bradford蛋白定量試劑盒
產(chǎn)品貨號:HR0332
產(chǎn)品規(guī)格:250T|1000T
Bradford法(考馬斯亮藍(lán)法),是目前靈敏度zuì高的蛋白質(zhì)測定法之一。當(dāng)Bradford染色液(考馬斯亮藍(lán)G250)和蛋白在酸性條件下結(jié)合時,溶液顏色由棕黑色轉(zhuǎn)為藍(lán)色,zuì大吸光值波長由456nm 轉(zhuǎn)至595nm,吸光值與蛋白質(zhì)的含量在一定濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系,通過測定吸光值大小并對照標(biāo)準(zhǔn)蛋白的吸光值,推算出蛋白濃度,實(shí)現(xiàn)了蛋白濃度測定的快速,穩(wěn)定和高靈敏度。
Bradford染色液為2倍濃縮母液,便于儲存。
儲存條件:染色液2-8℃保存。蛋白標(biāo)準(zhǔn)-20℃保存。
有效期:一年。
注意事項(xiàng):
●本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或治療。
● 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開蓋時試劑損失。
● 禁止與其他品牌的試劑混用,否則會影響使用效果。
● zuì好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并徹底清除殘留清潔劑。
● 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
試劑盒以外自備試劑和儀器:
● 移液器、吸頭 ● 水
● 渦旋振蕩器 ●分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀
使用注意事項(xiàng):
● Bradford 法對于去污劑敏感的,受高濃度去垢劑影響。需確保SDS低于0.1%,Triton X-100低于0.1%,Tween 20,60,80低于0.06%。含去垢劑的樣品推薦使用我公司的BCA蛋白濃度測定試劑盒。
●染色液使用前請混勻。
● 將G250染色液放置到室溫再使用,有利于提高檢測的靈敏度。
● 由于Bradford 法在蛋白濃度增高到一定時候,顏色反應(yīng)并不成比例增加,因此得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線只是在一定范圍內(nèi)可以近似看成直線,每次應(yīng)按照實(shí)際測得的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出相對的蛋白濃度。
● 反應(yīng)在5分鐘后顯色充分,但在10分鐘后可能開始出現(xiàn)沉淀,故建議在加入染色液后5-10分鐘內(nèi)完成檢測,誤差較小。
● zuì好使用塑料比色皿,如使用玻璃比色皿或石英比色皿,使用后立即用少量95%的乙醇清洗。
使用方法:
A、96孔酶標(biāo)板測定:
1.蛋白標(biāo)準(zhǔn)工作液配制:根據(jù)樣品數(shù)量配制相應(yīng)體積的蛋白標(biāo)準(zhǔn)工作液。將蛋白標(biāo)準(zhǔn)儲存液用雙蒸水5倍稀釋,配成1mg/ml的工作液。
2.標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制。
3.振蕩混勻后,室溫放置5-10分鐘。
4.用酶標(biāo)儀測定A595,以不含BSA的光吸收值為空白對照。
5.以蛋白含量(μg)為橫坐標(biāo),吸光值為縱坐標(biāo),繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
6.樣品測定:將待測蛋白樣品用去離子水稀釋至適當(dāng)濃度,取10μl 樣品,加入100μl 2×Bradford染色液和90μl的去離子水,混勻后放置5-10分鐘,然后以0 號孔為對照,測定樣品吸收值A(chǔ)595。
7.根據(jù)測得的吸收值,在標(biāo)準(zhǔn)曲線上即可查得樣品的蛋白含量。
8.計(jì)算蛋白濃度:以查得的蛋白含量除以樣品體積10μl,再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)即可得到待測樣品的實(shí)際濃度。
B、比色皿測定
按照比色皿規(guī)格,與以上方法相同,適當(dāng)按比例增加各溶液體積即可。
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關(guān)注
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