本試劑盒采用一步法實時熒光反轉錄聚合酶鏈式反應(One-Step Real Time RT-PCR) ，結合Taqman技術，對特異核酸進行定性或定量檢測。

北京大有泰萊生物技術有限公司成立于2014年10月，是注冊在中關村科技園區海淀創業園的高科技企業。公司主要從事食品安全檢測技術和動物疫病診斷技術的開發和產品研制生產及銷售，擁有自主知識產權的原料制作工藝和產品生產工藝。主要技術平臺為基于細胞技術的酶聯免疫技術和分子生物學PCR檢測技術平臺。即通過細胞培養獲得產品研制和生產所需原材料，開發出各種酶聯免疫檢測試劑盒，和通過基因合成獲得引物和探針，進而開發出各種PCR檢測試劑。其他相關技術為光機電一體化、移動互聯網技術、云存儲及物聯網技術等。主要產品為食品安全殘留（抗生素、激素、違禁添加物等）檢測試劑盒和目前農業部重點監控的動物疫病檢測試劑盒，前者主要用酶聯免疫技術，后者主要用酶聯免疫技術和PCR技術，主要面對客戶為經濟動物養殖企業、屠宰企業、政府食品安全及動物疫病監管部門，市場區域覆蓋全國各省市縣，將來計劃將產品輻射到中東和東南亞地區。     北京大有泰萊生物技術有限公司傳承業內診斷試劑研發生產的經驗，借鑒和學習國際先進技術，不僅在多個技術領域如：酶聯免疫技術、PCR技術、免疫親和層析、免疫磁珠、數字PCR技術、二代測序技術等均有較強的技術儲備，而且還相應開發出了一系列的具有國際競爭力的檢測診斷產品。公司引進國外先進的產品考評體系和生產環節質量控制體系，保障了診斷試劑的批量供應和高標準的品質。目前公司已成功開發產品20余種，多個產品技術指標屬業內領先。公司和國內外多個國家和地方科研單位和實驗室廣泛開展合作，團隊成員專業覆蓋面廣，技術實力強。除了傳統的獸醫學、微生物學、藥物化學、免疫學、分子生物學、光機電等學科外，公司創始團隊還融合了其他多個學科專業，如互聯網、移動信息技術、云存儲、大數據等IT專業技術以及3D打印、納米材料等其他材料及成型技術。所開發產品受到國內外用戶的一致好評。     公司從創辦伊始就確立了以自主創新為基礎、以市場為導向、以客戶為中心、以員工為根本的管理思想。公司集產品研發、生產、銷售、技術培訓于一體，通過團隊協作與相互信任，實現高效運轉和市場多贏。公司擁有優秀的人才隊伍、先進的儀器設備、規范化的生產和管理，為一流的產品提供了有力保障。公司將乘政策東風而上，緊密結合市場的訊息，在廣大用戶和合作伙伴的支持下，我們必將倍加努力，為百姓食品安全做出更好的貢獻。

規格：50頭份

介紹： 豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome ,PRRS）俗稱豬藍耳病，是由豬繁殖與呼吸綜合征引起的一種豬高度易感的傳染病。母豬以發情滯后，坐胎率低，懷孕后期流產、死胎和弱胎為特征；乳豬和斷乳仔豬以嚴重呼吸道疾病和高死亡為特征。美洲型豬繁殖與呼吸綜合征病毒（NA-PRRSV）是我國的主要流行毒株。衛生組織（OIE）將其列為必須通報疾病。我國2008年修訂的《一、二、三類動物疫病病種明錄》將其列為二類動物疫病。

用途：該試劑盒用于對 NA-PRRSV進行檢測，有助于NA-PRRSV的實驗室診斷、監測和流行病調查。

原理：本試劑盒采用一步法實時熒光反轉錄聚合酶鏈式反應(One-Step Real Time RT-PCR) ，結合Taqman技術，對特異核酸進行定性或定量檢測。

試劑盒的組成

試劑名稱	數量
NA-PRRS反應液	550μL×1管
NA-PRRS酶	40μL×1管
NA-PRRS引物探針	100μL×1管
無核酸水	1000μL×1管
NA-PRRS陰性對照	1000μL×1管
NA-PRRS陽性對照	150μL×1管

保存期及貯藏條件：本產品-20℃避光可保存12個月。

樣品收集，操作和儲存

1. 選擇發病早期，無菌采樣并立即送往實驗室進行病毒檢測。

2. 樣品短期可在4℃冷藏保存，較長時間保存應在-20℃或者-70℃，并且避免反復凍融。

檢測步驟

1.核酸提取

樣品進行適當處理后，可采用本公司的核酸提取試劑盒，該試劑盒可用于對樣本中病毒RNA的提取，請按照提取試劑盒說明書進行操作。也可選擇其他合適的商品化產品。

2.擴增試劑的準備

將樣品數+1份陰性對照+1份陽性對照設為N，計算試劑所需量，反應體系配制見下表

試劑名稱	N份用量（20μL 體系）
NA-PRRS反應液	10μL×（N+1）
NA-PRRS酶	0.5μL×（N+1）
NA-PRRS引物探針	1.8μL×（N+1）
無核酸水	5.7μL×（N+1）

將各試劑按照表中用量加入無菌離心管中，充分混勻，短暫離心后在PCR反應管中分別加入18μL混合液。

 

3.加樣

將制備好的樣本，陰性對照，陽性對照各取2μL分別加入對應反應管中，加完后蓋緊PCR反應管蓋，置于PCR儀上。

4.熒光PCR擴增與信號收集

循環數	溫度（℃）	時間	數據收集位點
1	45	15min	-
1	95	2min	-
40	95	15s	-
	60	1min	數據收集

 

 

 

 

 

 

注：報告基團選FAM,淬滅基團選NONE。

結果成立原則

陽性對照：CT值＜30并有明顯的擴增曲線。

陰性對照：無CT值或者CT值>37，線性為直線或者輕微斜線，無明顯擴增曲線。

以上要求需同時滿足，否則本次實驗無效，需要重新進行。

結果判定

CT值	樣本檢測結果
<30并有明顯的擴增曲線	陽性，樣本中檢測出NA-PRRSV
30-37	可疑，需重復檢測。若第二次檢測CT值仍為30-37并有明顯擴增曲線則判定為陽性，否則為陰性。
>37并無擴增曲線	陰性，樣本中未檢測出NA-PRRSV

 

注意事項

1.反應體系應在特定配液區或者超凈工作臺中配制，整個實驗過程嚴格控制污染。

2.PCR整個試驗分配液區、模板提取區、擴增區。流程順序為配液區→模板提取區→擴增區。嚴禁器材和試劑倒流。

3.使用不含熒光物質的一次性手套，一次性離心管。

4.反復凍融試劑將減低檢測靈敏度，本試劑盒應在5次內用完.

5．-20℃保存的各試劑管使用前應在室溫下完全融化，液體融化后需徹底混勻，2000 rpm離心15 s ，使用后立即放回-20 ℃。

6．在RNA提取過程中，避免RNA酶污染，盡量縮短操作時間。

7．注意防止試劑盒組分受污染。不要使用超過有效期限的試劑，試劑盒之間的成分不要混用。

8.PCR反應管避免氣泡存在，管蓋需蓋緊。

9.不同批次的試劑盒勿混用。

 

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