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價格：電議
所在地：北京
型號：HR0233-50T
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更新時間：2023-05-31
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公司地址：北京市海淀區紫雀路33號院3號樓
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王欣(女士) （來電時請說是從給覽網看到我的)
適用樣本：
● 組織 ● 細胞
試劑盒以外自備試劑和儀器：
● 移液器 ● 離心機 ● 振蕩器 ● Dounce勻漿器 ● 渦旋混勻器 ● PBS緩沖液
注意事項：
● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
● 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
● 最好使用標準Dounce勻漿器勻漿，如果沒有標準Dounce勻漿器，用普通1mL玻璃勻漿器勻漿也可，但是線粒體回收率會下降。
使用方法：
細胞線粒體提取：
1、取1-2×107個細胞，在4℃，500×g條件下離心2-3 分鐘，小心吸取培養基，盡可能吸干，收集細胞；
2、用冷PBS洗滌兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
【注】：
● 用1000×g力離心5分鐘。
3、細胞沉淀中加入500μL-1mL冷的試劑A重懸，置冰上5分鐘。
4、用 Dounce勻漿器勻漿30-40下，然后在4℃，500×g條件下離心5分鐘。
【注】：
● 先用Dounce勻漿器的松型槌初步勻漿10-20次，再用緊型槌勻漿20-30次。
● 每上下一個來回為一次。
5、將上清吸入另一預冷的干凈離心管，棄沉淀。
6、將上清在4℃，1000×g力條件下離心10分鐘。棄沉淀，收集上清。
7、將上清在4℃，11000×g力條件下離心15分鐘。棄上清，收集沉淀。
8、在沉淀中加入400μL冷的試劑B，輕輕混勻。
9、在4℃，11000×g以上條件下離心15分鐘。
10、棄上清，沉淀用線粒體保存液重懸。
【注】：
● 也可不用試劑盒中的線粒體保存液重懸。
● 根據實驗需要選擇合適的緩沖液重懸線粒體或直接用于下游實驗。
11、即得到線粒體樣品，置冰箱備用或直接用于下游實驗。
組織線粒體提取：
1、取50-100mg新鮮動物組織樣本，用PBS洗滌干凈。
2、用手術剪刀盡可能剪碎，用冷PBS洗滌兩次。
【注】：
● 用1000×g里離心5分鐘。
3、沉淀中加入500μL-1mL冷的試劑A混勻，置冰上5分鐘。
4、用Dounce勻漿器勻漿30-40下，然后在4℃，500×g條件下離心5分鐘。
【注】：
● 先用Dounce勻漿器的松型槌初步勻漿10-20次，再用緊型槌勻漿20-30次。
● 每上下一個來回為一次。
5、將上清吸入另一預冷的干凈離心管，棄沉淀。
6、將上清在4℃，1000×g力條件下離心10分鐘。棄沉淀，收集上清。
7、將上清在4℃，11000×g力條件下離心15分鐘。棄上清，收集沉淀。
8、在沉淀中加入400μL冷的試劑B，輕輕混勻。
9、在4℃，11000×g以上條件下離心15分鐘。
10、棄上清，沉淀用線粒體保存液重懸。
【注】：
● 也可不用試劑盒中的線粒體保存液重懸。
● 根據實驗需要選擇合適的緩沖液重懸線粒體或直接用于下游實驗。
11、即得到線粒體樣品，置冰箱備用或直接用于下游實驗。
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