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價格：電議
所在地：北京
型號：HR0037-50T
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更新時間：2023-05-31
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公司地址：北京市海淀區紫雀路33號院3號樓
18518407031(微信同步） 
王欣(女士) （來電時請說是從給覽網看到我的)
產品特點：
● 使用方便,不需經過研磨、反復凍融、超聲破碎等前處理。
● 含蛋白穩定劑,提取的蛋白穩定。
● 紫外檢測蛋白濃度時,背景干擾低。
● 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含7種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
試劑盒以外自備試劑和儀器：
● 離心機 ● 振蕩器 ● Dounce勻漿機/勻漿器 ● 渦旋混勻器 ● PBS（pH7.4） ● 蛋白定量試劑盒
使用注意事項：
● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內壁上的液體甩至管底,避免開蓋時液體灑落。
● 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
● 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀,不影響使用,溶解后正常使用。
● 可以根據自己實驗需要加入其他蛋白酶抑制劑單品。
使用方法：
細胞組蛋白提取：
1、提取液制備：
每500μL冷的蛋白提取液A中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物混勻后置冰上備用。
【注】：
● 根據需要處理的樣品數量準備蛋白提取液,蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
● 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內未使用完,再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。
● 以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。
2、收集5-10×106個細胞,在4℃,1000×g條件下離心5-10分鐘,吸干上清,收集細胞。
3、用冷PBS洗滌細胞兩次,每次洗滌后盡可能吸干上清。
4、每5-10×106個細胞種加入500μL蛋白提取液A,混勻后,在4℃條件下輕輕振蕩20-30分鐘。
【注】：
● 使用振蕩器/搖床的較低轉速,提取液能輕微晃動即可。
● 沒有振蕩條件也可以不振蕩,稍微延長提取液的的處理時間,中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。
5、在4℃,16000×g條件下離心15分鐘,棄上清。
6、在沉淀中加入100μL組蛋白提取液B。
7、用200μL槍頭反復吹打混勻或充分渦旋振蕩混勻。
8、置4℃冰箱過夜存放。
9、16000×g條件下離心10分鐘,收集上清。
10、在上清中加入10-25μL試劑C充分混勻。
11、加入上樣緩沖液混勻后煮沸,分裝于-80℃冰箱保存或直接用于下游實驗。
【注】：
● 加入上樣緩沖液后應為上樣緩沖液的藍色,如果顏色變黃,可以再加入試劑C混勻,每次加入5μL,至恢復藍色為止。
組織組蛋白提取：
1、提取液制備：
每500μL冷的蛋白提取液A中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物混勻后置冰上備用。
【注】：
● 根據需要處理的樣品數量準備蛋白提取液,蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
● 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內未使用完,再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。
● 以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。
2、取100mg組織樣本剪碎,加入500μL蛋白提取液A,用組織勻漿器/勻漿機充分勻漿至無明顯大塊固體。
3、將組織勻漿吸入一預冷的干凈離心管中,在4℃條件下輕輕振蕩20-30分鐘。
【注】：
● 使用振蕩器/搖床的較低轉速,提取液能輕微晃動即可。
● 沒有振蕩條件也可以不振蕩,稍微延長提取液的的處理時間,中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。
4、在4℃,16000×g條件下離心15分鐘,棄上清。
5、在沉淀中加入100μL組蛋白提取液B。
6、用200μL槍頭反復吹打混勻或充分渦旋振蕩混勻,置4℃冰箱過夜存放。
7、16000×g條件下離心10分鐘,收集上清。
8、在上清中加入25μL試劑C充分混勻。
9、加入上樣緩沖液混勻后煮沸,分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。
【注】：
● 加入上樣緩沖液后應為上樣緩沖液的藍色,如果顏色變黃,可以再加入試劑C混勻,每次加入5μL,至恢復藍色為止。
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