我司TMA-DPH試劑盒是利用TMA-DPH測定膜流動性的熒光探針法，它在脂蛋白及其類似系統的單分子層動力學研究中特別有用。DPH 及其衍生物（例如TMA-DPH）都呈圓柱形，會發生基于按長分子軸線平行排列而產生發射熒光向偶極躍遷。例如，它們對由于周圍脂類相互作用而導致的再定位非常敏感。它們廣泛地被用于旋轉運動研究中的熒光

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使用方法：

1、染色工作液的配制：

用稀釋液稀釋TMA-DPH 探針1000倍倍，配制成TMA-DPH染色工作液。

【注】：

● 也可以不用試劑盒中的稀釋液，直接用HBSS或PBS稀釋即可。

● 使用前做預實驗在推薦濃度范圍內測試選定最佳濃度。

● 推薦該探針加載濃度在1000-5000倍稀釋，具體的使用濃度需根據實驗要求進行優化。

2、用染色工作液重懸待測線粒體樣本，在37℃孵育15-45分鐘。

【注】：

● 一般每樣為大于200mg動物組織或1×10⁷細胞的線粒體。

● 線粒體的提取操作對檢測很重要，盡量減少對線粒體的損傷。

3、用pH7.4 HBSS或20mM HEPES或PBS洗滌線粒體1次。

4、用pH7.4 HBSS或20mM HEPES或PBS重懸線粒體。

5、用該線粒體樣本進行檢測。激發波長 355nm，發射波長430nm。

【注】：

● 熒光檢測需要使用熒光專用的透明底黑色培養板。

按下列公式計算熒光偏振度P：

P=（I_VV-GI_VH）/(I_VV+GI_VH)

P值越大，流動性越小；P值越小，流動性越大。

其中校正因子G=I_HV/I_HH

式中：

I_VV:起偏和檢偏器光軸同為垂直方向時測得的熒光強度(I_0°,0°)、(I_//)；

(激發光為垂直方向的偏振光，發射光為垂直方向的偏振光時測得的熒光強度)

I_VH:起偏和檢偏器光軸分別為垂直和水平方向時測得的熒光強度(I_0°,90°)、(I_⊥)；

I_HV:起偏和檢偏器光軸分別為水平和垂直方向時測得的熒光強度(I_90°,0°)；

I_HH:起偏和檢偏器光軸同為水平方向時測得的熒光強度(I_90°,90°)。

微粘度η=2P/(0.46-P)

P值越大，η越高，膜流動性越小；P值越小，η越低，膜流動性越大。

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