本試劑盒含有的獨特配方能夠有效溶解植物核組分。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等等下游蛋白研究。本試劑盒提取的蛋白為具有天然

北京百奧萊博科技有限公司是一家專業的生物試劑銷售公司。公司主要經營血清、抗原、抗體等生物試劑產品，可以為您提供專業的技術服務，以優良的價格、優質的服務、優先的理念，滿足客戶的各方面的需求，與國內多家企業、單位建立了良好的長期合作關系，擁有較好的企業信譽和品牌形象。 主營產品:血清、抗體、抗原、核酸提取、核酸純化等生化試劑

產品特點：

● 使用方便。

● 將蛋白提取的時間縮短至1小時。

● 含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。

● 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

● 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性。

試劑盒以外自備試劑和儀器：

● 離心機 ● 渦旋混勻器 ● 振蕩器 ● 勻漿機/勻漿器 ● 100μm細胞篩

● PBS ● 蛋白定量試劑盒

使用注意事項：

● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

● 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

● 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

● 可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

使用方法：

1、提取液制備：

每300μL冷的蛋白提取液B中加入2μL蛋白酶抑制劑；

每300μL冷的蛋白提取液C中加入2μL蛋白酶抑制劑，混勻后置冰上備用。

【注】：

● 根據需要處理的樣品數量準備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

● 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

2、取洗凈擦干后并去除葉梗和粗脈的200-500mg植物組織樣本用手術剪刀盡可能剪碎，加入1-2mL提取液A后用勻漿機充分勻漿或者用Dounce勻漿器充分勻漿。

【注】：

● 勻漿盡可能充分，至無明顯可見固體。

● 培養細胞直接收集細胞后用Dounce勻漿器勻漿即可，勻漿后加提取液A混勻后直接進行以下步驟離心。

● 處理葉片等組織樣本如果沒有勻漿機，也可先加少量提取液A后用Dounce勻漿器充分勻漿后再加提取液A混勻。

3、將勻漿液用100μm細胞篩過濾。

【注】：

● 沒有細胞篩時可以不過濾，將勻漿液靜置1分鐘，待大的沒有破碎的組織塊自然沉降，吸取上清。

● 部分黏液較多的植物樣本可能難以吸取，可以將1mL吸頭的口剪掉一點再吸。

4、將濾液在1000×g條件下離心10分鐘，收集上清（Ⅰ），收集沉淀（Ⅰ）。

5、在沉淀（Ⅰ）中加入200-300μL提取液B，充分混勻。

6、置振蕩器振蕩30分鐘。

【注】：

● 用振蕩器/搖床的較低轉速，保持液體有輕微晃動即可。

● 沒有低溫振蕩條件可以不振蕩，在2-8℃靜置，稍微延長處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。

7、在4℃，10000×g條件下離心10分鐘。

8、將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到核蛋白。

9、將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。

10、將上清（Ⅰ）在30000×g力條件下離心20分鐘，棄上清，收集沉淀（Ⅱ）。

【注】：

● 實驗室離心機達不到30000×g力時，使用離心機能達到的最大離心力，延長離心時間至30分鐘。

11、在沉淀（Ⅱ）中加入200-300μL提取液C，充分混勻。

12、置振蕩器振蕩30分鐘。

【注】：

● 用振蕩器/搖床的較低轉速，保持液體有輕微晃動即可。

● 沒有低溫振蕩條件可以不振蕩，在2-8℃靜置，稍微延長處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。

13、在4℃，10000×g條件下離心10分鐘。

14、將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到細胞器蛋白。

15、將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。

【注】：

● 建議用BCA法進行蛋白定量。

● 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題，注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細菌污染。

常見分體分析：

● 蛋白濃度低？

植物核蛋白豐度較低，在條件允許的情況下，盡可能加大樣本量。

處理部分樣本時可能沒有裂解完全，導致導致蛋白濃度低。只要適當增加試劑A的勻漿次數，并適當延長試劑B和C的處理時間即可。最好在持續振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻，至無明顯沉淀。

● 用什么方法定量蛋白？

建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。如果已經進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

● 提取時出現膠狀沉淀？

蛋白提取液處理產物中有時會出現少量透明膠狀物，屬正常現象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復合物。不檢測和基因組DNA結合特別緊密的特定蛋白的情況下，可以直接離心取上清進行后續實驗即可；如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理，300w/10秒間隔10秒，超聲3分鐘，隨后離心取上清用于后續實驗。檢測一些常見的轉錄因子，例如NF-kappaB、p53等時，不必進行超聲處理。

● 提取的蛋白具有活性嗎？

本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結構，沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構象和活性。

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