本裂解液提取的蛋白可用于WB、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。本裂解液提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。本裂解液中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。

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產品特點：

● 使用方便，從細胞、組織中提取蛋白不需經過研磨、反復凍融、超聲破碎等前處理。

● 提取過程簡單方便。

● 含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。

● 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

● 蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白和膜蛋白，又可結合釋出的蛋白防止沉淀。

● 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性。

試劑盒以外自備試劑和儀器：

● 離心機 ● 振蕩器 ● 渦旋混勻器 ● 超聲細胞破碎儀 ● 移液器 ● PBS ● 蛋白定量試劑盒

使用注意事項：

● 螺旋蓋微量管裝試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內壁上的液體收集至管底,避免開蓋時液體灑落。

● 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

● 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

● 如果試劑盒不能短時間用完，蛋白酶抑制劑混合物不可一次全部加入提取液。

● 可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

使用方法：

1、裂解液的準備：

根據所需提取的樣本量，每500μL裂解液中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物，充分混勻后置冰上備用。

【注】：

● 以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配好的含蛋白酶抑制劑的提取液。

2、在4℃,10000×g條件下將菌液離心10min，棄上清，盡量吸干剩余液體，收集菌體。

【注】：

● 若為已經收集好的冷凍菌體直接進行下面操作步驟即可。

3、用PBS洗菌體2次。

4、按每50-100mg濕重菌體樣本加入500μL裂解液，混勻，冰上放置20-30分鐘。

【注】：

● 每次的裂解液用量并不是一定的，請根據實際情況調整。

5、在150w-300w，10s超聲/10s間隔條件下冰浴超聲至菌液變清。

【注】：

● 超聲時間盡量短，提取液變清即可，一般不超過20分鐘。

● 如果超聲時出現黑色沉淀，說明超聲功率過大，需要降低功率。

● 避免產生泡沫。

● 若無超聲條件，可不超聲，將菌體樣本用液氮充分研磨。沒有液氮研磨就用裂解液A直接研磨。

● 若無研磨條件，將上一步驟裂解液處理時間延長，持續振蕩1-2小時。

● 如果沒有振蕩條件，可以靜置，中間每隔10分鐘混勻，至澄清。

6、在4℃，12000×g條件下將菌液離心10分鐘，將上清移入冷的干凈離心管。

7、即得到細菌總蛋白樣品。

8、將細菌總蛋白樣品定量后分裝置于-80℃冰箱或直接用于下游實驗。

【注】：

● 建議用BCA方法進行蛋白定量。相關產品：HR0329。

● 蛋白樣品-80℃存放一年沒問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細菌污染。

常見問題分析：

● 細胞裂解速度慢？

為了充分保證提取得到的蛋白的活性，提取液采用獨特的保護蛋白的配方，裂解能力溫和，下游應用范圍廣。適當延長裂解的時間即可。

● 蛋白濃度低？

處理部分樣本時可能沒有裂解完全，導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑A的處理時間即可。最好在持續振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

● 提取的蛋白具有活性嗎？

本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結構，沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構象和活性。

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