ECM Kit(兔IgG)由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品用于科研試驗(yàn)，ECM Kit(兔IgG)是我司眾多優(yōu)質(zhì)免疫檢測之一，質(zhì)量堪比同類進(jìn)口產(chǎn)品，價(jià)格非常優(yōu)惠，目前正熱烈促銷中，恭候您的咨詢訂購。

北京百奧萊博科技有限公司是一家專業(yè)的生物試劑銷售公司。公司主要經(jīng)營血清、抗原、抗體等生物試劑產(chǎn)品，可以為您提供專業(yè)的技術(shù)服務(wù)，以優(yōu)良的價(jià)格、優(yōu)質(zhì)的服務(wù)、優(yōu)先的理念，滿足客戶的各方面的需求，與國內(nèi)多家企業(yè)、單位建立了良好的長期合作關(guān)系，擁有較好的企業(yè)信譽(yù)和品牌形象。 主營產(chǎn)品:血清、抗體、抗原、核酸提取、核酸純化等生化試劑

特別提示：包括ECM Kit(兔IgG)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：ECM Kit(兔IgG)
產(chǎn)品貨號：ZN1926
產(chǎn)品規(guī)格：1盒

用途：適于一抗為兔IgG的Western Blotting 檢測。
保存條件：4℃可保存一年 。
Western Blotting 檢測試劑盒內(nèi)容：
1.封閉試劑：10g 蛋白質(zhì)干粉(脫脂奶粉)。
2.HRP 標(biāo)記羊抗兔IgG：0.1ml 親和純化抗體，經(jīng)過人血清吸附以去除交叉抗體。
效價(jià) 1：2000-10000。
3.ECM 顯色劑：總量 10ml。含 A 液 5ml(×20倍)；B 液 5ml(×20倍)。每個(gè)試劑盒足夠 10 張小膜或800 c ㎡面積的膜顯色。
工作原理：
蛋白質(zhì)的電泳分離是重要的生物化學(xué)分離純化技術(shù)之一,電泳是指帶電粒子在電場作用下 ,向著與其電荷相反的電移動(dòng)的現(xiàn)象。根據(jù)所采用的支持物不同,可分為：瓊脂糖凝膠電泳、淀粉凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳等。其中以聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)zuì廣泛。它的優(yōu)點(diǎn)為：無電滲作用,樣品用量少(1-100μg),分辨率高,可檢出 10-9-10-12mol的樣品,
凝膠機(jī)械強(qiáng)度大,重復(fù)性好以及可以通過調(diào)節(jié)單體濃度或單體與交聯(lián)劑的比例而得到孔徑不同的凝膠。SDS-PAGE 是zuì常用的定性分析蛋白質(zhì)的電泳方式,它根據(jù)蛋白分子大小不同，遷移速率的不同而達(dá)到分離目的，特別是用于蛋白質(zhì)純度檢測和測定蛋白質(zhì)分子量。
免疫印跡是將凝膠電泳的高分辨力和免疫化學(xué)檢測的特異性融為一體。免疫印跡技術(shù)先借助凝膠電泳將蛋白質(zhì)抗原分離，然后將凝膠中的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印到膜上使之成為被分離的一個(gè)拷貝。免疫印跡為檢測樣品中是否存在目的蛋白提供一種可靠的方法，該法鑒定蛋白質(zhì)的原理是根據(jù)被測蛋白能與特異性抗體結(jié)合的特性并通過相對遷移率來體現(xiàn)該蛋白的分子量。
如果想要了解樣品中是否存在某一抗原，以及該抗原的含量或該抗原多肽鏈的相對分子質(zhì)量以及亞型，是否與其他蛋白結(jié)合，蛋白質(zhì)的酪氨酸殘基是否發(fā)生磷酸化等有關(guān)問題均可采用免疫印跡。
免疫印跡包括多個(gè)簡單步驟，可在一到兩天完成，該方法具有，簡便，靈敏等特點(diǎn)。
實(shí)驗(yàn)操作步驟：
1．蛋白質(zhì)的樣品制備：
1)細(xì)胞培養(yǎng)蛋白質(zhì)樣品的制備：
1：胰酶消化后裂解：細(xì)胞培養(yǎng)至 80%左右密度時(shí)，以含 0.25%胰蛋白酶消化,室溫，低速離心，棄上清。細(xì)胞經(jīng)預(yù)冷的PBS 漂洗3次，加入 0.1-1ml 裂解液(根據(jù)細(xì)胞數(shù)量定)反復(fù)吹打。
2：皿上直接裂解：細(xì)胞培養(yǎng)至 80%左右密度時(shí)，細(xì)胞經(jīng)預(yù)冷的PBS 漂洗3次，加入 0.1-1ml 裂解液(根據(jù)細(xì)胞數(shù)量定)，用細(xì)胞刮刀收集，轉(zhuǎn)移至離心管中，反復(fù)吹打。
2)組織樣品的制備：新鮮組織塊迅速置于預(yù)冷的生理鹽水中，漂洗數(shù)次，按組織凈重：裂解液=1：10的比例，加入相應(yīng)體積的裂解液進(jìn)行勻漿，離心收集上清(如有粘稠物可超聲處理)
3)蛋白變性：處理后的樣品加入樣品緩沖液(按樣品濃度 1：1或1：2的比例)混勻，樣品置 1000C的水浴箱加熱 3-5分鐘，10000g 離心 10分鐘，取上清液。(樣品可立即使用也可以分裝凍存，-20℃可穩(wěn)定保持?jǐn)?shù)月。)
2．SDS-PAGE 電泳：
1)．制 膠：①按比例配制分離膠(丙烯酰胺母液：單體：雙體=29：1)，緩緩地?fù)u動(dòng)溶液，使激活劑混合均勻，將凝膠溶液平緩地注入兩層玻璃中，再在液面上小心注入一層水或正丁醇，以阻止氧氣進(jìn)入凝膠溶液中，37℃恒溫箱中靜置 60min。
②同前按比例配制濃縮膠，但混勻溶液時(shí)不要過于劇烈以免引入過多的氧氣。吸去不連續(xù)系統(tǒng)中下層分離膠上的水分，以連續(xù)平穩(wěn)的液流注入凝膠溶液，然后小心插入梳子并注意不得在齒尖留有氣泡，37℃恒溫箱中靜置60min 以上以保證完全聚合。
2)加 樣：依次加入標(biāo)準(zhǔn)品和待分析樣品。(加樣時(shí)間要盡量短，以免樣品擴(kuò)散，可在未加樣的孔中加入等量的樣品緩沖液避免邊緣效應(yīng)。樣品一般在 1.0mm 厚6、顯色(ECM)ECM 顯色劑配制:按 1ml 蒸餾水，加顯色劑 A、B 各 1 滴混勻。將雜交后印跡膜放入顯色盒中,加上混合好的顯色液反應(yīng)約 1-5分鐘。吸去印跡膜邊緣顯色液,將一透明的玻璃紙蓋住撫平,以確保×感光膠片的干燥。印跡膜轉(zhuǎn)入暗室中使膠片曝光 30＇-5分鐘。
7、顯影，定影。 將曝光后的×感光膠片放入顯影液中沖洗至膠片上出現(xiàn)條帶或者膠片透明為止,再放入定影液中定影，膠片可長期保存。

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貨號	名稱	規(guī)格
YT084	冰凍切片快速抗原修復(fù)液(5X)	100ml
ZN1882	彩色預(yù)染超低分子量蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)(10-20次)	100μl
ZN1901	麗春紅染色液(1×)	100ml
ZN1945	多聚賴氨酸 Poly-L-lysine	10ml
ZN1952	復(fù)合消化液	10ml
ZN1953	TBS漂洗緩沖液	1包
ZN1972	二乙酸熒光素(FDA)	1g/5g

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名稱：Western半干法轉(zhuǎn)膜液
貨號：YT064
規(guī)格：1L|10×1L
本品可以用于Western時(shí)半干法電轉(zhuǎn)膜。本W(wǎng)estern半干法轉(zhuǎn)膜液是一種安全的轉(zhuǎn)膜液，沒有使用劇毒的甲醇，也沒有使用其它的有毒試劑。配制Western 半干法轉(zhuǎn)膜液的方法非常便捷，不需要調(diào)節(jié)pH值。本W(wǎng)estern轉(zhuǎn)膜液共1瓶，可以配制1升Western半干轉(zhuǎn)膜液。

注意事項(xiàng)：
1. 配制好的半干法轉(zhuǎn)膜液可室溫或4℃保存。配制好的半干法轉(zhuǎn)膜液長期存放后，如果顏色變成淺棕色或黃褐色，應(yīng)丟棄。
2. 需使用分析純級別的乙醇或純度更高的乙醇。

儲存條件：室溫，有效期兩年。

名稱：抗熒光淬滅封片液
貨號：YT097
規(guī)格：5ml
本品是一種用于減緩熒光淬滅的封片試劑。可以用于減緩各種常見熒光染料的熒光淬滅。操作簡單，在封片時(shí)用移液器滴一滴抗熒光淬滅封片液在樣品上，蓋上蓋玻片即可完成操作。按照每個(gè)樣品封片需要50微升計(jì)算，足夠用于100個(gè)樣品的封片。

注意事項(xiàng)：
1. 熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，染色后的樣品宜避光保存。可以向百奧萊博選購各種型號的載玻片存儲盒。
2. 在使用抗淬滅封片液的情況下可以減緩淬滅，但仍宜盡量避光。

儲存條件：-20℃，有效期一年。

名稱：抗熒光淬滅封片液(強(qiáng))
貨號：YT098
規(guī)格：5ml
本品是一種用于減緩熒光淬滅的封片試劑。可以用于減緩各種常見熒光染料的熒光淬滅。本抗熒光淬滅封片液在使用前需把抗熒光淬滅試劑加入到抗熒光淬滅試劑溶劑中，充分溶解并混勻后即可使用。配制好的抗熒光淬滅封片液可-20℃避光保存至少3個(gè)月。操作簡單，在封片時(shí)用移液器滴一滴配制好的抗熒光淬滅封片液在樣品上，蓋上蓋玻片即可完成操作。按照每個(gè)樣品封片需要50微升計(jì)算，足夠用于100個(gè)樣品的封片。

注意事項(xiàng)：
1. 熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，染色后的樣品宜避光保存。
2. 在使用抗淬滅封片液的情況下可以減緩淬滅，但仍宜盡量避光。
3. 需把抗熒光淬滅試劑一次性全部加入到抗熒光淬滅試劑溶劑中，充分溶解并混勻后方可使用。

名稱：封閉液(用PBS配置，不含去垢劑)
貨號：YT871
規(guī)格：100ml
本品是zuì新一代的快速封閉液，總體效果顯著優(yōu)于傳統(tǒng)的基于BSA(牛血清白蛋白)、脫脂奶粉、酪蛋白(Casein)等的封閉液及國外同類產(chǎn)品，可以用于Western blot (WB)、Immunofluorescence (IF)、Immunohistochemistry (IHC)、Immunocytochemitry (IC) 等實(shí)驗(yàn)中的封閉、一抗或二抗的稀釋。本產(chǎn)品配制在PBS中，不含去垢劑。按照每張膜封閉需要5-10ml封閉液計(jì)算，一個(gè)包裝的本產(chǎn)品 可以封閉10-20張膜。


本封閉液快速。封閉時(shí)間通常僅需5-15分鐘，并且和BSA、脫脂奶粉、酪蛋白等傳統(tǒng)封閉液以及國外同類的快速 封閉液相比，顯示出更強(qiáng)的信噪比(參考下圖)。

本封閉液封閉后背景低。本封閉液不含血清和白蛋白，確保高的信噪比。

本封閉液兼容性好，兼容辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶和生物素標(biāo)記的二抗。本產(chǎn)品中添加了不影響HRP和AP活性的防腐劑，不會(huì)干擾HRP或AP標(biāo)記二抗的檢測。同時(shí)本產(chǎn)品不含生物素，不會(huì)干擾基于生物素的檢測。
本封閉液使用靈活。本產(chǎn)品配制在PBS中，可以直接用于相關(guān)實(shí)驗(yàn)，但也可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要自行添加Tween-20或Triton X-100 至終濃度為0.05%-0.1%后用于封閉、一抗或二抗的稀釋。

本產(chǎn)品與BSA及國外同類產(chǎn)品的封閉效果對比參見下圖。在相同樣品和實(shí)驗(yàn)條件下，僅封閉液及封閉時(shí)間存在如下圖所示的差異時(shí)，我公司的本封閉液封閉后的整體背景明顯低于BSA封閉后的背景，而且目的條帶亮度明顯高于國外同類品牌產(chǎn)品。


每組實(shí)驗(yàn)從左到右依次為：5μl蛋白Marker，2.5μg蛋白量的HeLa細(xì)胞裂解液，5μg蛋白量的HeLa細(xì)胞裂解液。請注意對于抗體A，本封閉液比BSA和國外同類產(chǎn)品具有更低 的背景，并且和國外同類產(chǎn)品相比信號明顯更強(qiáng)。對于抗體B，本封閉液比BSA具有更低的背景，和國外同類產(chǎn)品相比信號明顯更強(qiáng)。實(shí)際實(shí)驗(yàn)結(jié)果會(huì)因樣品、抗體、實(shí)驗(yàn)條件等的不同而存在差異，圖中數(shù)據(jù)僅供參考。

注意事項(xiàng)：
1. 本產(chǎn)品推薦僅使用一次，重復(fù)使用可能會(huì)導(dǎo)致封閉效果下降。但對于一些信噪比很高的一抗，例如一些內(nèi)參抗體，本封閉液可以重復(fù)使用2-3次。回收的封閉液請勿與未使用 過的封閉液混合。
2. 通常本產(chǎn)品用于PVDF膜及NC膜時(shí)的封閉時(shí)間為5-15分鐘。對于一些背景非常高的抗體，可以嘗試將封閉時(shí)間延長為30-60分鐘。此外，如有特殊需要，也 完全可以4℃封閉過夜。
3. 由于沒有任何一種封閉液是適用于所有實(shí)驗(yàn)體系的，因此對于一些特殊的實(shí)驗(yàn)，可能需要根據(jù)具體情況考慮使用其它更合適的封閉液。
4. 取放PVDF膜和NC膜應(yīng)使用平頭鑷子，并僅輕輕夾取其邊角，操作過程須避免膜表面產(chǎn)生劃痕、折痕或壓痕等痕跡。
5. PVDF膜一經(jīng)浸潤和活化，需一直保持濕潤，根據(jù)Western進(jìn)行到的具體步驟可放置于western轉(zhuǎn)膜液或洗滌液等適當(dāng)溶液中，否則可能會(huì)產(chǎn)生難以封閉的異 常背景。
6. 在背景較高的情況下，為進(jìn)一步提高信噪比，本產(chǎn)品中可以自行添加Tween-20或Triton X-100至終濃度為0.05%-0.1%。

儲存條件：4℃，有效期一年。

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