特別提示:包括2×Pfu PCR MasterMix (不含染料)在內,本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途!
產品名稱:2×Pfu PCR MasterMix (不含染料)
產品貨號:QN0968
產品規格:1ml|5ml
PCR MasterMix包含三種酶(Taq,Pfu,Taq plus),每種酶對應著兩種PCR MasterMix(含染料和不含染料),一共六種PCR MasterMix。
Taq:擴增效率zuì高的耐熱DNA聚合酶,其擴增速度約為1-2kb/min。擴增堿基出錯率為10-5左右。其產物未端帶有A,可直接用于TA克隆。
Pfu:目前保真度zuì高的耐熱DNA聚合酶,堿基出錯率為10-6,但擴增效率低于Taq酶,一般能很好的擴增2kb以下的片段。其擴增速度約為500bp/min左右。其產物為平未端,須加A后才可用于TA克隆。
Taq Plus:Taq和Pfu的等比混合物。集擴增效率高和保真度好于一身。擴增效率比Pfu高,保真度比Taq好。其擴增速度約為1000bp/min左右。其產物未端帶有A,可直接用于TA克隆。
染料PCR MasterMix反應完后可以直接電泳檢測。不含染料的PCR MasterMix反應完后加入上樣緩沖液后電泳檢測。
別名:2×Pfu PCR MasterMix (不含染料)
英文名稱:2×Pfu PCR MasterMix (不含染料)
儲存條件:-20
性狀:液體
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名稱:PCR級綠如藍DNA染料
貨號:BTN70909
規格:0.1mL
第二代的非飽和型熒光染料(如SYBR Green I)在高濃度下會抑制熒光PCR,所以反應重復性很不穩定,并且不能用于要求嚴格的Tm分析。本產品跟SYTO9、LC Green、EvaGreen一樣,是第三代飽和型熒光染料,在飽和濃度下也不抑制熒光PCR反應。
產品特點:
1. 飽和濃度不抑制PCR反應,因此得到的熒光信號更強。
2. 抗水解、抗熱解和抗光解的能力強于目前zuì常用的SYBR Green I。
3. 飽和濃度下染料分子沒有機會在DNA分子間發生移位,因此熒光強度跟DNA變性程度呈線性關系,可以用于精細的Tm 測定實驗,如High-resolution melting curve analysis等。
4.跟目前常用的PCR 儀器(包括iCycler、LightCycler、ABI 測序儀)兼容。激發和發射光譜跟FAM和SYBR Green I 接近,可以使用SYBR Green I的光學設置參數。
5. 不能滲透進入細胞內,毒性和致突變性遠低于SYBR Green I。
6.可以用于qPCR、高分辨DNA 溶解曲線分析(HRM、high-resolution DNA melt curve analysis)、毛細管電泳等研究。
儲存條件:常溫運輸、-20℃避光保存,有效期一年。
使用方法:
先將本產品放置在室溫融化,然后震蕩10秒鐘,短暫離心后待用。下面以50μL的標準PCR反應體系為例說明其使用:
1.在一干凈的PCR 管中,加入下列成分:
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試劑
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加入量
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10×PCR Buffer(No Mg2+)
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5μl
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MgCl2 50mM
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2.5μl
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dNTP 10mM
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1μl
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本產品(PCR級綠如藍染料)
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2.5μl
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Taq DNA聚合酶
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1-5U
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DNA模板
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適量
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PCR引物
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5-50 pmol each
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補水到
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50μl
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2. 放入熒光PCR 儀中進行qPCR,并在退火或延長反應時記錄熒光信號。使用的光學參數可以跟FAM或SYBR Green I 完全一樣。
注意事項:
1. 如果使用iCycler,可以不加FAM;如果使用ABI系統,需要在Well Inspector選項下的非特異參照中選擇“無”;使用LightCycler時,zuì好在PCR 體系中再加入終濃度為0.5mg/mL的BSA以降低儀器對染料和模板的非特異吸附。
2. 如果使用化學修飾過的Taq DNA聚合酶,可能需要減低KCl的濃度并提高Tris的濃度。
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