小鼠孕酮激素 ELISA 試劑盒產品介紹：
應用：定量檢測小鼠血清、血漿、細胞液、體液以及組織勻漿中 PROG 的含量
（詳細說明書以英文為準）
產品編號：E03P0200 本試劑盒僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一． 小鼠孕酮激素 ELISA 試劑盒試劑盒組成
名稱 規格 數量 保存
1 預包被平底微孔板 96 孔 1 可拆卸板 2-8℃密封冷藏
2 酶結合物(HRP) 6 毫升 1 瓶 2-8℃冷藏
3 標準品 1 毫升 6 瓶 2-8℃冷藏
4 顯色劑A 6 毫升 1 瓶 2-8℃冷藏
5 顯色劑B 6 毫升 1 瓶 2-8℃避光冷藏
6 終止液 6 毫升 1 瓶 2-8℃冷藏
7 濃縮洗滌液 (100 倍濃縮) 10 毫升 1 瓶 2-8℃冷藏
8 平衡液 3 毫升 1 瓶 2-8℃冷藏
9 使用說明書 1 份
注意：平衡液僅僅適用于標本是細胞液、體液以及組織勻漿樣品的檢測時所使用

二．小鼠孕酮激素 ELISA 試劑盒樣本處理及保存：
1. 血清
采集血清時不加抗凝劑，采集后室溫靜置 1-2 小時，1000 × g (或 3000 rpm)離心 15 分鐘，
取上清，-20℃或-80℃分裝保存備用。
2. 血漿
采集血漿，要加入總體積 1%的抗凝劑 (EDTA，肝素等)，采集后先室溫或 4℃靜置半
小時后，1000 × g (或 3000 rpm)離心 15 分鐘，取上清，-20℃或-80℃分裝保存備用。
3. 組織裂解液
組織裂解的方式取決于組織的類型，一般來講，先用預冷的 PBS (0.02mol/L, pH 7.0-7.2) 清洗組織后稱重。一般 0.5g 組織加入 1-5ml 預冷的 PBS (0.02mol/L, pH 7.0-7.2)，在冰
上的玻璃容器內研碎。用超聲或者反復凍融的方法裂解細胞膜，1500×g (或 5000 rpm) 離
心 15 分鐘后取上清，-20℃或-80℃分裝保存備用。
4. 細胞裂解液
1) 懸浮細胞直接離心取細胞沉淀。貼壁細胞需用胰酶消化后離心取細胞沉淀。檢測某些指
標時不能用胰酶消化。
2) 用 PBS (0.02mol/L, pH 7.0-7.2) 洗 3 遍。
3) 用少量 PBS 重懸細胞，超聲或者反復凍融的方法裂解細胞膜，1500×g (或 5000 rpm) 離
心 15 分鐘后取上清，-20℃或-80℃分裝保存備用。
5. 細胞上清及體液
1000 × g (或 3000 rpm)離心 15 分鐘，取上清，-20℃或-80℃分裝保存備用。
注意事項：
1. 樣本收集完畢后，要分裝保存在-20°C (少于 3 個月) 或-80°C (少于 6 個月)以保持蛋白活
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性和避免污染。避免反復凍融 如果要在 24 小時內分析樣本，可以保存在 2- 8°C。
2. 凍存的樣本應該緩慢的恢復到室溫，然后慢慢地混勻，不能加熱來融化樣本。
3. 某些化學裂解液會對某些指標的檢測會有干擾，比如 SDS，Triton。謹慎使用。
4. 樣本液中含有沉淀物會對 ELISA 有干擾，務必離心去除。
5. 不要使用高脂血或溶血的樣本，對 ELISA 有干擾，導致檢測結果不準確。
6. 其他樣本的準備方法，請聯系藍基技術部售后服務人員。

三．小鼠孕酮激素 ELISA 試劑盒試劑準備
1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存。
2. 加 10 ?L 的平衡液于 100 ?L 的樣品中，比例不要小于 1:10，混勻。如果標本是血清或
者血漿，此步驟忽略。
3. 洗液的配制：按 1:100 的比例配制洗液備用。

四．小鼠孕酮激素 ELISA 試劑盒操作步驟（實驗前必須仔細看實驗準備）
1. 取出試劑盒，于室溫（20-25℃）放置 30 分鐘。
2. 取出酶標板，按照標準品的次序分別加入 100 ?L 的標準品溶液于空白微孔中。
3. 空白微孔中加入 100 ?L 的樣品，空白對照加入 100? ?L 的蒸餾水。
4. 在各孔中加入 50 ?L 的酶標記溶液（不含空白對照孔）。
5. 將酶標板用封口膠密封后，37℃孵育反應 1 小時（在孵育箱中保持穩定的溫度與濕度）。
6. 充分清洗酶標板 5 次，保持各孔有充足的水壓（濃縮洗滌液以 1：100 的比例與蒸餾水
稀釋）。
7. 酶標板洗滌后用吸水紙徹底拍干。
8. 各孔加入顯色劑 A 50 ?L。
9. 各孔加入顯色劑 B 50 ?L。
10. 20-25℃下避光反應 10 分鐘。
11. 各孔加入 50 ?L 終止液，終止反應。

五．小鼠孕酮激素 ELISA 試劑盒實驗注意事項
1. 實驗操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染。
2. 加樣：加樣時，要控制加樣速度，避免一孔與后一孔之間的時間間隔過大，否則將
會導致不同的預孵育時間，從而影響實驗的準確性以及重復性；一般加樣時間控制在
10 分鐘內，如果樣本數量過多，可使用多道移液器。
3. 孵育：樣品要在密閉的容器內進行孵育，嚴格按照說明書上規定的孵育時間和溫度進行。
4. 洗滌：洗滌過程中反應孔中的殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，同時要消除板底殘留
的液體和手指痕跡，避免影響后的酶標儀讀數。
5. 反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化（比如，10 分鐘左右），如
果顏色較深，請提前加入終止液終止反應。
6. 建議實驗前預測樣品含量，如樣品濃度過高，應對樣品進行稀釋，計算結果時乘以相應
的稀釋倍數。
7. 建議使用本試劑盒時先做預實驗（即先做標準曲線，試用幾個標本），如果對本試劑盒
有任何疑問，可和所購經銷商聯系，如果因運輸過程導致試劑盒失效，可要求調換，但
概不承擔產品本身以外的任何損失。