小鼠促卵泡生成激素 ELISA 試劑盒產(chǎn)品介紹：

小鼠促卵泡生成激素 ELISA 試劑盒應(yīng)用：
定量檢測小鼠血清、血漿、細胞液、體液以及組織勻漿中 FSH 的含量
（詳細說明書以英文為準）

產(chǎn)品編號：E03F0001

本試劑盒僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一． 小鼠促卵泡生成激素 ELISA 試劑盒組成
注意：平衡液僅僅適用于標本是細胞液、體液以及組織勻漿樣品的檢測時所使用
名稱 規(guī)格 數(shù)量 保存
1 預(yù)包被平底微孔板 96 孔 1 可拆卸板 2-8℃密封冷藏
2 酶結(jié)合物(HRP) 10 毫升 1 瓶 2-8℃冷藏
3 標準品 1 毫升 6 瓶 2-8℃冷藏
4 顯色劑A 6 毫升 1 瓶 2-8℃冷藏
5 顯色劑B 6 毫升 1 瓶 2-8℃避光冷藏
6 終止液 6 毫升 1 瓶 2-8℃冷藏
7 濃縮洗滌液 (100 倍濃縮) 10 毫升 1 瓶 2-8℃冷藏
8 平衡液 3 毫升 1 瓶 2-8℃冷藏
9 使用說明書 1 份
二．小鼠促卵泡生成激素 ELISA 試劑盒樣本處理及保存：
1. 血清
采集血清時不加抗凝劑，采集后室溫靜置 1-2 小時，1000 × g (或 3000 rpm)離心 15 分鐘，
取上清，-20℃或-80℃分裝保存?zhèn)溆谩?br /> 2. 血漿
采集血漿，要加入總體積 1%的抗凝劑 (EDTA，肝素等)，采集后先室溫或 4℃靜置半
小時后，1000 × g (或 3000 rpm)離心 15 分鐘，取上清，-20℃或-80℃分裝保存?zhèn)溆谩?br /> 3. 組織裂解液
組織裂解的方式取決于組織的類型，一般來講，先用預(yù)冷的 PBS (0.02mol/L, pH 7.0-7.2) 清洗組織后稱重。一般 0.5g 組織加入 1-5ml 預(yù)冷的 PBS (0.02mol/L, pH 7.0-7.2)，在冰
上的玻璃容器內(nèi)研碎。用超聲或者反復(fù)凍融的方法裂解細胞膜，1500×g (或 5000 rpm) 離
心 15 分鐘后取上清，-20℃或-80℃分裝保存?zhèn)溆谩?br /> 4. 細胞裂解液
1) 懸浮細胞直接離心取細胞沉淀。貼壁細胞需用胰酶消化后離心取細胞沉淀。檢測某些指
標時不能用胰酶消化。
2) 用 PBS (0.02mol/L, pH 7.0-7.2) 洗 3 遍。
3) 用少量 PBS 重懸細胞，超聲或者反復(fù)凍融的方法裂解細胞膜，1500×g (或 5000 rpm) 離
心 15 分鐘后取上清，-20℃或-80℃分裝保存?zhèn)溆谩?br /> 5. 細胞上清及體液
1000 × g (或 3000 rpm)離心 15 分鐘，取上清，-20℃或-80℃分裝保存?zhèn)溆谩?br />
注意事項：
1. 樣本收集完畢后，要分裝保存在-20°C (少于 3 個月) 或-80°C (少于 6 個月)以保持蛋白活
性和避免污染。避免反復(fù)凍融 如果要在 24 小時內(nèi)分析樣本，可以保存在 2- 8°C。
2. 凍存的樣本應(yīng)該緩慢的恢復(fù)到室溫，然后慢慢地混勻，不能加熱來融化樣本。
3. 某些化學裂解液會對某些指標的檢測會有干擾，比如 SDS，Triton。謹慎使用。
4. 樣本液中含有沉淀物會對 ELISA 有干擾，務(wù)必離心去除。
5. 不要使用高脂血或溶血的樣本，對 ELISA 有干擾，導(dǎo)致檢測結(jié)果不準確。
6. 其他樣本的準備方法，請聯(lián)系藍基技術(shù)部售后服務(wù)人員。

三．小鼠促卵泡生成激素 ELISA 試劑盒試劑準備
1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存。
2. 加 10 ?L 的緩沖液于 100 ?L 的樣品中，比例不要小于 1:10，混勻。如果標本是血清或
者血漿，此步驟忽略。
3. 洗液的配制：按 1:100 的比例配制洗液備用。

四．小鼠促卵泡生成激素 ELISA 試劑盒操作步驟（實驗前必須仔細看實驗準備）
1. 取出試劑盒，于室溫（20-25℃）放置 30 分鐘。
2. 取出酶標板，按照標準品的次序分別加入 50 ?L 的標準品溶液于空白微孔中。
3. 空白微孔中加入 50 ?L 的樣品，空白對照加入 50? ?L 的蒸餾水。
4. 在各孔中加入 100 ?L 的酶標記溶液（不含空白對照孔）。
5. 將酶標板用封口膠密封后，37℃孵育反應(yīng) 1 小時（在孵育箱中保持穩(wěn)定的溫度與濕度）。
6. 充分清洗酶標板 5 次，保持各孔有充足的水壓（濃縮洗滌液以 1：100 的比例與蒸餾水
稀釋）。
7. 酶標板洗滌后用吸水紙徹底拍干。
8. 各孔加入顯色劑 A 50 ?L。
13
9. 各孔加入顯色劑 B 50 ?L。
10. 20-25℃下避光反應(yīng) 10 分鐘。
11. 各孔加入 50 ?L 終止液，終止反應(yīng)。

五．小鼠促卵泡生成激素 ELISA 試劑盒實驗注意事項
1. 實驗操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染。
2. 加樣：加樣時，要控制加樣速度，避免一孔與后一孔之間的時間間隔過大，否則將
會導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時間，從而影響實驗的準確性以及重復(fù)性；一般加樣時間控制在
10 分鐘內(nèi)，如果樣本數(shù)量過多，可使用多道移液器。
3. 孵育：樣品要在密閉的容器內(nèi)進行孵育，嚴格按照說明書上規(guī)定的孵育時間和溫度進行。
4. 洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中的殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，同時要消除板底殘留
的液體和手指痕跡，避免影響后的酶標儀讀數(shù)。
5. 反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化（比如，10 分鐘左右），如
果顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。
6. 建議實驗前預(yù)測樣品含量，如樣品濃度過高，應(yīng)對樣品進行稀釋，計算結(jié)果時乘以相應(yīng)
的稀釋倍數(shù)。
7. 建議使用本試劑盒時先做預(yù)實驗（即先做標準曲線，試用幾個標本），如果對本試劑盒
有任何疑問，可和所購經(jīng)銷商聯(lián)系，如果因運輸過程導(dǎo)致試劑盒失效，可要求調(diào)換，但
概不承擔產(chǎn)品本身以外的任何損失。