1）洗滌不正確：

遺漏一步洗滌可能導致高背景。加入適當體積的洗滌液確保洗滌次數(shù)正確，確信正確的稀釋洗滌液并且在孔內存留幾秒。

2）底物被污染：

在使用之前確保底物沒有金屬離子污染和被氧化，底物本身是不帶顏色的。

3）稀釋劑污染：

大多數(shù)人的牛血清白蛋白殘留檢測試劑盒的稀釋劑都是蛋白質基質，一開始可能污染稀釋劑，應該用滅菌的移液管移出稀釋劑。

4）底物暴漏于光下：

直接暴露于燈下，會使底物顏色表問深藍色。

5）偶聯(lián)物稀釋不正確：

確保每一步都按照稀釋指導手冊進行，偶聯(lián)物濃度太高可能會導致高背景。

6）孵育時間/溫度不正確：

孵育時間/溫度嚴格按照ELISA操作說明進行

7）ELISA板儲存錯誤：

只用了一部分板，要確保剩余的一部分4℃ 儲存。