產品名稱：人白介素1可溶性受體Ⅰ(IL-1sRⅠ)ELISA試劑盒

  英文名稱：Human soluble interleukin-1 receptor Ⅰ,IL-1sRⅠ ELISA KIT

  規格：48人份/96人份

  儲存：2-8℃，避光保存

  實驗準備工作

  1、試劑配制:洗滌液按1:20三蒸水稀釋;標準品在用前每管加入200 ?l蒸餾水溶解即可(具體見說明書);底物工作液應在顯色前5-10 min將OPD片放入底物稀釋液中溶解,每片加5 ml液。

  2、標本收集:采集血清或體液盡早檢測,2~8 ℃保存一天需長時間須冷凍(-20℃)保存,避免反復凍融;組織(胎肝、胎腦等)實驗前一天組織勻漿,用90%體積RIPA裂解液(PH 8.0,50 mM Tris HCl、1% NP-40、,0.25% sodium deoxycholate、150 mM NaCl、1 mM EDTA)和10%體積的10 mM PMSF進行組織勻漿(10%),冰上裂解30 min,12000×20min后取上清,4℃待用。

  3、器材準備:酶標儀、37 ℃恒溫烤箱、濾紙、托盤、量筒、燒杯、各種規格的移液器、離心管、管架和廢液缸等。三蒸水自備。

  操作步驟

  1、設立標準孔8孔(根據樣品蛋白濃度可調整為6孔),每孔中先各加入樣品稀釋液100 ul,孔再加標準品100 ul,混勻后用移液器吸出100 ul,移至第二孔,如此反復作對倍稀釋至第7孔,后,從第7孔中吸出100 ul棄去,使之體積均為100 ul。第8孔為空白對照。

  2、加樣:待測樣品孔中每孔各加入待測樣品100ul。

  3、將反應板置于37 ℃×120 min。

  4、洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次,向濾紙上扣干。

  5、每孔中加入抗體工作液50ul。

  6、將反應板充分混勻后置37 ℃×60 min。

  7、洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌4~6次,向濾紙上扣干。

  8、每孔加酶標抗體工作液100ul。

  9、將反應板置于37 ℃ 120 min。

  10、洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌4~6次,向濾紙上扣干。

  11、每孔中加入底物工作液100ul, 置于37 ℃暗處反應5~10 min。

  12、每孔中加入50ul終止液混勻。

  13、用酶標儀在492 nm處測吸光值。

  人白介素1可溶性受體Ⅰ(IL-1sRⅠ)ELISA試劑盒計算結果與判斷

  1、以標準品 1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、0 pg/ml之OD值在半對數紙上作圖,畫出標準曲線。

  2、所有OD值都應減去空白管值后再計算。

  根據樣品OD值在該標準曲線圖上查出或根據標準曲線公式換算出相應樣品中TNF-a含量。

  人白介素1可溶性受體Ⅰ(IL-1sRⅠ)ELISA試劑盒注意事項

  1、以上標準孔及待查樣品均建議做復孔,每次測定均要做標準孔。

  2、本試劑盒宜置-20 ℃冷藏保存。

  3、本人ELISA試劑盒取出的試劑在室溫(20~25 ℃)環境下使用,溶液應輕輕搖勻后使用。

  4、本試劑盒含2M硫酸,不要將它與含疊氮化鈉的廢物混在一起。

  5、板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。

  6、避免交叉污染。如洗滌時向樣品待測蛋白含量可能高的一側傾倒。

  7、提前24 h打開烤箱預熱。

  8、底物工作液應在顯色前5~10 min配制。若配制時間過長,會變質。

  9、甩盡孔內液體,每孔加350 ul左右洗滌液,靜止30 s后甩盡。尤其加抗體工作液或底物時盡量弄干孔內液體。且孵育過程中要蓋住各反應孔,防止液體恢復。

  10、盡量防止樣品待測蛋白濃度過高而出現酶標儀顯示out。當酶標儀測定值出現許多out時,可通過稀釋一定倍數后用可見光分光計測定,所有孔均同時測定