中文名稱：細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒
英文名稱：Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit
產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T
分類：細(xì)胞染色
用途：流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡
注意事項(xiàng)：自備乙醇70%和PBS,流式細(xì)胞儀488nm處檢測(cè)紅色熒光
儲(chǔ)存條件：—20℃,避光,12個(gè)月

細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒采用了經(jīng)典的碘化丙啶染色(Propidium staining，即PI staining)方法進(jìn)行細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡的分析。

碘化丙啶 (Propidium，PI) 是一種雙鏈DNA熒光染料，其嵌入雙鏈DNA后可以產(chǎn)生熒光，并且熒光強(qiáng)度和雙鏈DNA的含量成正比。細(xì)胞內(nèi)的DNA被PI染色后，可以用流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞進(jìn)行DNA含量測(cè)定，根據(jù)DNA含量的分布情況，進(jìn)行細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡分析。

PI染色后，假設(shè)G0/G1期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為1，那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度的理論值為2，正在進(jìn)行DNA復(fù)制的S期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為1-2之間。凋亡細(xì)胞由于細(xì)胞核發(fā)生濃縮以及發(fā)生DNA片段化 (DNA fragmentation) 導(dǎo)致部分基因組DNA片斷在染色過程中丟失，因此凋亡細(xì)胞PI染色后呈現(xiàn)明顯的弱染，即熒光強(qiáng)度小于1，在流式檢測(cè)的熒光圖上出現(xiàn)所謂的sub-G1峰，即凋亡細(xì)胞峰。

細(xì)胞凋亡也可以用流式細(xì)胞儀觀察細(xì)胞光散射的變化來檢測(cè)。 細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，由于胞漿和染色質(zhì)濃縮、核碎裂，產(chǎn)生凋亡小體，使細(xì)胞的光散射性質(zhì)發(fā)生變化。凋亡前期，染色質(zhì)皺縮，細(xì)胞密度增加，前向角光散射色顯著降低。凋亡后期，細(xì)胞產(chǎn)生凋亡小體，前向角光散射和側(cè)向角光散色都顯著降低。

本試劑盒通常應(yīng)用于培養(yǎng)的貼壁或懸浮細(xì)胞的細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)。如果用于組織的細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)，則必須把組織消化成單細(xì)胞狀態(tài)，才可以進(jìn)行檢測(cè)。

注意事項(xiàng)

1）本試劑盒需要使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。
2）細(xì)胞處理需輕柔，盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
3）為防止不同批次細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)時(shí)所處周期不同導(dǎo)致重復(fù)性差，可以在實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行細(xì)胞的同步化處理。實(shí)驗(yàn)細(xì)胞應(yīng)處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，貼壁細(xì)胞一般在50～80%匯合度時(shí)收集為宜。
4）400目篩網(wǎng)過濾是用來將粘在一起的細(xì)胞團(tuán)濾掉，留下單細(xì)胞，否則會(huì)出現(xiàn)人為的多倍體干擾。如果沒有條件過濾，請(qǐng)?jiān)谌旧皩⒓?xì)胞輕彈以分散，再進(jìn)行染色。
5）熒光染料均存在淬滅問題，保存和使用過程中請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。