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超氧化物歧化酶(SOD)提取試劑實驗步驟

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  • 更新日期:2021-02-23 11:48
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詳細介紹
中文名稱:超氧化物歧化酶(SOD)提取試劑

儲存條件:4℃,12個月

產品規格:500ml

用途:超氧化物歧化酶(SOD)提取液主要用于裂解組織樣本、細胞樣本,提取樣品中的過氧化物酶。該試劑僅用于科研領域,不宜用于臨床診斷或其他用途。

產品簡介:超氧化物岐化酶(Superoxide Dismutase, SOD)是含金屬輔基的酶,能催化超氧化物陰離子發生岐化作用,生成過氧化氫(H2O2)和氧氣(O2),是生物體內一種重要的抗氧化酶。由于超氧自由基是不穩定的的自由基,壽命極短,SOD活性一般用間接方法測定,并利用各種呈色反應來測定SOD活力,其中顯色劑有NBT(四氮唑藍)、WST-1、WST-8等。

實驗步驟:
1.酶液制備
稱取植物組織0.5g先加入2.5ml PBS,研磨勻漿后,再加入2.5ml PBS混勻,4℃下 10000r/min離心15min 上清液即為粗酶液。取部分上清液經適當稀釋后用于酶活性測定。
2.酶活性測定
取10ml小燒杯7只, 3只測定樣品,4只作為對照,將試劑混勻后,1只對照燒杯至于暗處,另3只對照燒杯和樣品一起置于4000lx日光燈下反應20min(要求各管受光一致,溫度高時時間縮短,溫度低時可適當延長)。zui后在560nm處測定反應液的光密度。以不照光的對照燒杯作參比,分別測定其他各管的光密度。
3.蛋白含量的測定
步驟1的上清液經適當稀釋后用考馬斯亮藍 G-250法測定蛋白含量.

實驗原理:
植物體內的黃素氧化酶類代謝產物常包含H2 02 ,如光呼吸中的乙醇酸氧化酶、呼吸作用中 的葡萄糖氧化酶等。H2 02 的積累可導致破壞性的氧化作用。過氧化氫酶(CAT)、過氧化物酶(POD)是清除 H2 02 的重要保護酶,能將H2 02 分解為02 和H2 0, 從而使機體免受H2 02 的毒害作用。其活性與植物的抗逆性密切相關。
(CAT)催化如下反應:
2 H2 02 →2 H2 0 + 02
本實驗通過測定H2 02 的減少量來測定CAT的活性。
在H2 02 存在條件下,過氧化物酶能使愈創木酚氧化,生成茶褐色的4-鄰甲氧基苯酚。可用分光光度計測生成物的含量來測定活性。

實驗結果及計算:
CAT和POD的酶活性以U/mg蛋白或U/gFW表示。
 
 
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