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酒石酸酸性磷酸酶染液實(shí)驗(yàn)原理

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  • 更新日期:2020-12-07 11:16
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詳細(xì)介紹
中文名稱:酒石酸酸性磷酸酶染液

細(xì)胞和組織的酸性磷酸酶染色主要由萘酚、六氮化對(duì)品紅、亞硝酸鈉等組成,染色后酶活性部位呈紅色。

酸性磷酸酶染色液(偶氮偶聯(lián)法)以萘酚AS-BI為底物,在酸性pH下被酸性磷酸酶水解釋放出磷酸和萘酚,萘酚與重氮鹽偶聯(lián)生成有色產(chǎn)物,定位于細(xì)胞質(zhì)中。對(duì)某些酸性磷酸酶來(lái)講,Cu2+、酒石酸根離子和四氯化碳以及醛類也都是抑制劑,Mn2+為該酶的激活劑。多用于新鮮血涂片、細(xì)胞涂片、冰凍切片等。

【產(chǎn)品介紹】抗酒石酸酸性磷酸酶主要存在于正常人肺泡巨噬細(xì)胞等部位的TRAP和存在于細(xì)胞白血病人脾臟TRAP均在細(xì)胞濾泡中,并不釋放入血液,血液中TRAP絕大部分來(lái)源于破骨細(xì)胞。因而測(cè)量血液中TRAP可以了解破骨細(xì)胞的功能狀態(tài)。

【染色原理】在堿性的緩沖液中,細(xì)胞內(nèi)酸酸性磷酸酶催化底物水解,其生成物進(jìn)而與一種穩(wěn)定的重氮鹽偶聯(lián),生成不溶性的偶氮染料沉淀,當(dāng)?shù)孜镏写嬖诰剖釙r(shí),該反應(yīng)只出現(xiàn)在特異性細(xì)胞中。

【染色結(jié)果】陽(yáng)性反應(yīng)為鮮紅色或深紅色顆粒,定位胞漿。

【產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)】

① 磷酸酶系列染色液為重氮偶聯(lián)法,染色效-果好,磷酸酶的特異性反應(yīng)沉著于胞漿當(dāng)中,形成紅色或紅棕色的顆粒沉淀。再通過(guò)核染色液的復(fù)染色,對(duì)比度清晰、分明。

 ② 染色液無(wú)嗅、無(wú)味、無(wú)刺激、不脫色,不含有毒性的物質(zhì),對(duì)人體無(wú)傷害。 ③ 操作步驟簡(jiǎn)單,只需固定—底物液孵育—復(fù)染三步,省時(shí)、準(zhǔn)確、操作簡(jiǎn)便。 ④ 染色建議使用水性介質(zhì)-甘油明膠進(jìn)行封片固定。⑤ 該磷酸酶系列染色液均使用進(jìn)口原料,質(zhì)量保證,價(jià)格低廉,特別是抗酒石酸酸性磷酸酶染液,為國(guó)內(nèi)獨(dú)-家生產(chǎn),物美價(jià)廉。

【所需儀器】光學(xué)顯微鏡、玻片、染缸、滴管、秒表、記號(hào)筆等。

具體試劑配制及操作:

一、固定液:液體,40ml×1瓶

新鮮血涂片、細(xì)胞涂片或爬片、冰凍切片用固定液固定5~10min。石蠟包埋的切片經(jīng)脫臘后不需要再固定。

二、底物反應(yīng)液(一)、(二)、(三)、(四)的組成及配制:

●底物反應(yīng)液(一)組成及配制

組成:(1)A粉×1支    (2)B液500ul×1支

(3)C粉×1支    (4)D液500ul×1支

配制:臨用前將B液用移液器吸入A粉中充分溶解配成甲液,備用

再將D液移液器吸入C粉中充分溶解配成乙液,備用

zui后將甲液與乙液混合成底物反應(yīng)(一),備用

●底物反應(yīng)液(二)組成及配制:

組成:(1)E粉×1支    (2)F500ul×1支

配制:臨用前將底物反應(yīng)液二的F液移液器吸入E粉中充分溶解配成底物反應(yīng)液(二),備用。

●底物反應(yīng)液(三):G液1ml×1支,備用

●底物反應(yīng)液(四)組成及配制:

組成:(1)H粉×1支    (2)I液500u l×1支

配制:臨用前將I液移液器吸入H粉中充分溶解配成底物反應(yīng)液四,備用

 
 
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