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腸道菌增菌肉湯(EE 肉湯)實驗方法

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  • 更新日期:2020-11-02 13:16
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詳細介紹
產(chǎn)品名稱:腸道菌增菌肉湯(EE 肉湯)
英文名稱:Enterobacteria enrichment broth?(EE broth)
規(guī)格:250g/瓶
用途:用于腸桿菌科細菌的增菌培養(yǎng)。
用法:稱取本品45克,加熱攪拌溶解于1000ml蒸餾水中,分裝三角瓶,每瓶100ml,100℃加熱30分鐘,迅速在流動的冷水中冷卻,無需高壓滅菌。
質(zhì)量控制和典型特征:
本培養(yǎng)基配制好后為綠色液體,接種10-100個大腸桿菌于36±1℃培養(yǎng)18-24h,應生長良好。
保存方法:防潮、避光、陰涼處保存。
作用:細胞的分離、鑒定、計數(shù)。
貯存:培養(yǎng)基在30℃下放置一天,無污染的即可使用。一般用牛皮紙包裹好存放于2-8℃冰箱中備用。

實驗內(nèi)容:
1.稱量→溶化→調(diào)pH→過濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無菌檢查
2.干熱滅菌:裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開箱取物
3.高壓蒸汽滅菌:加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無菌檢查
4.過濾除菌:組裝滅菌→連接→壓濾→無菌檢查→清洗滅菌

實驗的步驟:
(一)準確稱量試劑:根據(jù)不同的菌類和用途,選擇適宜的培養(yǎng)基,培養(yǎng)基所需試劑必須純凈。
(二)校正pH值:將稱量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內(nèi),標記劃線,加熱溶解,補充水分,測定酸堿度,常用pH6.8~8.0的精-密試紙或酸度計測定。用1N NaOH和1N HCl調(diào)節(jié)pH值到適宜范圍內(nèi)。
(三)過濾:將玻璃漏斗置鐵架上,再用紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中,將上述培養(yǎng)基倒入其中過濾至透明。
(四)分裝:將過濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶內(nèi)(試管內(nèi)每支裝5mL;三角瓶中裝100~150ml),塞好棉塞用牛皮紙包扎好,準備滅菌。
(五)滅菌:培養(yǎng)基的滅菌,常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營養(yǎng)細胞在水中煮沸后即被殺死,但細菌的芽胞有較強的抗熱性,須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能達到徹底滅菌的目的。根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理,即壓力越大,蒸汽溫度就越高。因此,在同一溫度條件下,采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下,菌體吸收水分后,其蛋白質(zhì)易于凝固變性,因為蒸汽的穿透力強,殺菌效果-好。
 
 
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