綠如藍染料，PCR級說明書
產品編號：BTN70909
規格：1ml
產品及特點：
第二代的非飽和型熒光染料（如SYBR Green I）在高濃度下會抑制熒光PCR，所以反應重復性很不穩定，并且不能用于要求嚴格的Tm 分析。本產品跟SYTO9、LC Green、EvaGreen 一樣，是第三代飽和型熒光染料，在飽和濃度下也不抑制熒光PCR 反應，具有下列特點：
1. 飽和濃度不抑制PCR 反應，因此得到的熒光信號更強。
2. 抗水解、抗熱解和抗光解的能力強于目前zui常用的SYBR Green I。
3. 飽和濃度下染料分子沒有機會在DNA 分子間發生移位，因此熒光強度跟DNA變性程度呈線性關系，可以用于精細的Tm 測定實驗，如High-resolution melting curve analysis 等。
4. 跟目前常用的PCR 儀器(包括iCycler、LightCycler、ABI 測序儀) 兼容。
激發和發射光譜跟FAM 和SYBR Green I 接近，可以使用SYBR Green I 的光學設置參數。
5. 不能滲透進入細胞內，毒性和致突變性遠低于SYBR Green I。
6. 可以用于qPCR、高分辨DNA 溶解曲線分析(HRM、high-resolution DNA melt curve analysis)、毛細管電泳等研究。
規格及成分：
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成分 |
規格 |
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綠如藍染料,PCR級 |
1ml |
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說明書 |
1份 |
保存條件：
常溫運輸、-20℃避光保存，有效期一年。
自備試劑：
PCR 試劑、DNA 模板、引物、超純水。
使用方法：
先將本產品放置在室溫融化，然后震蕩10 秒鐘，短暫離心后待用。下面以50μL的標準PCR 反應體系為例說明其使用：
1. 在一干凈的PCR 管中，加入下列成分：
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10 X PCR Buffer (No Mg2+) |
5μl |
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MgCl2 50 mM |
2.5μl |
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dNTP 10 mM |
1μl |
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本產品(PCR 級綠如藍染料) |
2.5μl |
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Taq DNA聚合酶 |
1-5U |
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DNA模板 |
適量 |
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PCR引物 |
5-50 pmol each |
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補水到 |
50μl |
2. 放入熒光PCR 儀中進行qPCR，并在退火或延長反應時記錄熒光信號。使用的光學參數可以跟FAM 或SYBR Green I 完全一樣。
注意事項：
1. 如果使用iCycler，可以不加FAM；如果使用ABI系統，需要在Well Inspector選項下的非特異參照中選擇“無”；使用LightCycler時，zui好在PCR 體系中再加入終濃度為0.5 mg/mL的BSA以降低儀器對染料和模板的非特異吸附。
2. 如果使用化學修飾過的Taq DNA聚合酶，可能需要減低KCl的濃度并提高Tris的濃度。
