一步法質粒DNA提取試劑盒2.0說明書

產品編號：BTN70903

規格：50T/100T

產品及特點：

基于堿變性原理的質粒小量制備(Miniprep)是分子克隆研究中zui常用的方法之一，其操作包括三種溶液處理，一般需要30 分鐘左右的時間才能得到可以上柱的質粒DNA 初提液。本產品采用百奧萊博開發的一步式細菌裂解技術，只需要一種溶液處理即可以完成細菌裂解，并且裂解物可以直接上柱純化質粒DNA。本產品的主要特點是:

1. 一步式裂解細菌，比傳統的堿變性方法更快捷。

2. 產量跟經典堿變性法相當或更高，產率一般為3-5 μg 質粒DNA/mL 飽和菌液（對高拷貝質粒而言）。

3. DNA 純度高，OD260/280 一般在1.8 左右，基因組DNA 和RNA 污染少。

4. 可以直接用于電泳、酶切、PCR、細菌轉化、分子克隆、測序等實驗。

5. 重復性和穩定性好。

格及成分：

保存條件：

常溫運輸及保存（溶液A需要4℃保存），有效期一年。

使用方法：

1. 用塑料離心管收集不超過3 mL 過夜培養飽和菌液，室溫12000-15000 g 離心半分鐘，棄上清。注意:不能超過3 mL 菌液，否則質粒回收率將急劇降低。

2. 加入 0.6-1 mL 溶液A(用前需搖勻)，充分吹打或振蕩裂解細菌直到裂解變澄清，一般需要半分鐘左右。注:此方法不同于堿裂解法，故可以充分吹打。

3. 將裂解液全部轉移到離心吸附柱中，室溫靜置2 分鐘使質粒DNA 與膜結合。室溫12000-15000 g 離心半分鐘，棄穿透液。如果一次不能將上清全部轉移到離心吸附柱中，可以分兩次進行。

4. 在離心吸附柱中加入0.7 mL 的通用預洗液，室溫12000-15000 g 離心半分鐘，棄穿透液。注意: 如果通用預洗液放置在低溫產生了沉淀，用前需要加熱到60℃左右使之融化，混勻后再用。

5. 再在離心吸附柱中加入0.3 mL 的通用預洗液，室溫12000-15000 g 離心半分鐘，棄穿透液。此步預洗zui好別省略，否則DNA 純度不高。

6. 在離心吸附柱中加入0.7 mL 的通用洗柱液，室溫12000-15000 g 離心半分鐘，棄穿透液。

7. 再在離心吸附柱中加入0.7 mL 的通用洗柱液，室溫12000-15000 g 離心半分鐘，棄穿透液。此為第二次洗滌。

8. 再在離心吸附柱中加入0.4 mL 的通用洗柱液，室溫12000-15000 g 離心半分鐘，棄穿透液。此為第三次洗滌，如果不洗滌三次，zui后得到的質粒DNA 的OD260 和280 的比值達不到1.8。

9. 室溫 12000-15000 g 離心半分鐘，甩干殘留液體。注意：此步不能省略，否則殘留乙醇會影響后續的電泳上樣（DNA 沉不到加樣孔里去）和酶反應。

10. 將離心柱置于一個新的1.5 mL 自備塑料離心管中，加入30-100 μL DNA 洗脫液2.0，室溫放置2 分鐘。如果將DNA 洗脫液2.0 預熱到65-80℃，則效果更好。

11. 室溫 12000-15000 g 離心半分鐘，離心管底溶液即質粒DNA，可以直接用于后續實驗或放冰箱長期保存。

注意：如果需要去除DNA 樣品中的內毒素，請使用百奧萊博的液相內毒素清除劑。