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馬伊氏錐蟲說明書

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  • 更新日期:2014-01-02 11:53
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詳細介紹
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馬伊氏錐蟲酶聯免疫分析(ELISA
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
藥品名稱:
通用名:馬伊氏錐蟲酶聯免疫分析試劑盒
使用目的:
本試劑盒用于定性測定馬血清,血漿及相關液體樣本中伊氏錐蟲
實驗原理
本試劑盒采用間接法測定標本中馬伊氏錐蟲。用純化的伊氏錐蟲溫育后,加入生物素標記的抗IgG抗體,再與鏈霉親和素-HRP結合,形成免疫復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中馬伊氏錐蟲的存在與否。, 抗體包被微孔板,制成固相抗體,與樣品中伊氏錐蟲
試劑盒組成
1
20倍濃縮洗滌液
50ml×1瓶
8
樣品稀釋液
6ml×1瓶
2
鏈霉親和素-HRP
6ml×1瓶
9
陰性對照
0.5ml×1瓶
3
酶標包被板
12孔×8條
10
陽性對照
0.5ml×1瓶
4
生物素標記的抗-IgG抗體
6ml×1瓶
11
密封袋
1個
5
顯色劑A液
6ml×1瓶
12
封板膜
3張
6
顯色劑B液
6ml×1/瓶
13
說明書
1份
7
終止液
6ml×1瓶
 
 
 
 
標本要求
1.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
2.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
操作步驟
1.         編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照(不加樣品,生物素標記的抗-IgG抗體,鏈霉親和素-HRP,其余操作相同)1孔
2.         加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,37℃溫育45分鐘。
3.         配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
4.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復4次,拍干。
5.         加生物素標記的抗-IgG抗體:每孔加入生物素標記的抗-IgG抗體50μl(空白孔除外)。37℃溫育30分鐘
6.         洗滌:操作同4。
7.         加鏈霉親和素-HRP:每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP(空白孔除外),輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
8.         洗滌:操作同4。
9.         顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11.     測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
結果判定:
  試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
 臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
 陰性判定:樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為馬伊氏錐蟲陰性
 陽性判定:樣品OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為馬伊氏錐蟲陽性
注意事項
1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。
2.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
3.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5.底物請避光保存。
6.試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm
7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須注意安全。
規格:
96人份/盒
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8
2.有效期:6個月
 
 
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