用于測定大鼠血清，血漿及相

關液體樣本中瘦素（leptin）的含量。

實驗原理：

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠瘦素（leptin）水平。用純化的大鼠瘦素（leptin）

抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入瘦素（leptin），再與HRP

標記的瘦素（leptin）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過徹底洗滌后加底物

TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏

色的深淺和樣品中的瘦素（leptin）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD

值），通過標準曲線計算樣品中大鼠瘦素（leptin）濃度。

標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10 孔，在一、第二孔中分別加標

準品100μl，然后在一、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從一孔、第二

孔中各取100μl 分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，

混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉，再各取50μl 分別加到第五、第六孔

中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各

取50μl 分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混

勻后從第七、第八孔中分別取50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準

品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl 棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，

濃度分別為6.0μg/L，4.0μg/L ，2.0μg/L，1.0μg/L， 0. 5μg/L）。

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣

品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣

品終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混

勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4. 配液：將30（48T 的20 倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T 的20 倍）倍稀釋后備用。

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此

重復5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

15 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止

液后15 分鐘以內進行。