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ND試劑檢驗原理介紹
發布時間:2018-01-11瀏覽次數:1531返回列表
ND試劑用于試驗檢測,下面,我們來介紹下ND試劑檢驗原理:
本試劑盒基于實時熒光PCR平臺,結合等位基因特異性擴增(ARMS)技術、野生型基因擴增抑制技術和多重PCR技術檢測EGFR基因19、21外顯子的14種突變。
ARMS技術是指PCR引物的3’端末位堿基必須與其模板DNA互補才能有效擴增,通過設計特異性ARMS引物組(共6條ARMS上游引物,包括5條檢測19外顯子突變和1條檢測21外顯子突變的引物)和2條下游引物,對存在突變的EGFR基因19、21外顯子的靶序列進行多重PCR擴增,并利用分別標記有HEX熒光基團——BHQ1淬滅基團和FAM熒光基團——BHQ1淬滅基團的兩條Taqman 探針分別實現對19,21突變外顯子擴增產物進行檢測。
因為人類EGFR基因突變檢測試劑盒采用了野生型基因擴增抑制劑,使ARMS體系能夠耐受更高濃度的背景野生型EGFR基因,降低了試劑盒對基因組樣本的DNA濃度要求,提高了檢測靈敏度。
為質控擴增體系的有效性,試劑盒設置了內質控和外質控,內質控基因是人類基因組的一個保守片段,長度與EGFR目標片段相似,均為100bp左右,內控探針采用標記ROX熒光基團——BHQ2淬滅基團的Taqman探針對內控基因擴增產物進行檢測。
內控引物、探針及內控基因對ARMS體系的擴增效率無影響。陽性對照品是一種擴增效率低的EGFR基因19外顯子L747_P753>S突變質粒與野生型人類基因組DNA的混合物,用于PCR擴增的外質控。


