RNA建庫試劑盒上線,誰才是真正的幕后玩家
發(fā)布時間：2019-07-18瀏覽次數(shù)：1097返回列表
RNA建庫試劑盒產(chǎn)品，適合于illumina測序平臺，試劑盒中的每種組分都經(jīng)過了嚴格的質(zhì)量控制。
建庫流程
利用oligo dT磁珠，從總RNA純化得到mRNA，經(jīng)過片段化（300bp左右）、合成一鏈和二鏈cDNA，再通過末端修復(fù)、加A、連接接頭和PCR富集得到zui終的cDNA文庫。
Tips：RNA樣品檢測的4種主要方法
(1) 瓊脂糖凝膠電泳分析RNA降解程度以及是否有污染
(2) Nanodrop檢測RNA的純度（OD260/280比值）
(3) Qubit對RNA濃度進行定量
(4) Agilent 2100檢測RNA的完整性
適應(yīng)范圍
樣本種類：動、植物及真菌等真核生物的總RNA
建庫起始量：100ng-1.5μg，推薦RNA RIN值≥7
插入片段：150bp-200bp或250-300bp
注：以1.5μg小鼠總RNA為起始模板，caliper檢測文庫大小分布情況，主峰值在408bp左右
溫馨提示：
（1）RNA純化在室溫條件下操作，RNA樣本稀釋后冰上放置，并盡快進入下一步實驗，避免RNA發(fā)生降解；
（2）RNA打斷條件以及后續(xù)片段篩選需要嚴格按照sop進行，否則會影響文庫大小及產(chǎn)量；
（3）試劑盒中的產(chǎn)品組分，不可拆分，不可與其他品牌同種試劑配套使用，否則影響建庫結(jié)果。
RNA建庫試劑盒注意事項
1、試驗前請仔細閱讀本說明書，注意每個組分的保存溫度，確保實驗順利完成。
2、Stranded Oligo需-80℃保存，使用時少量分裝使用。
3、操作過程請注意避免核酸樣品和產(chǎn)物之間的交叉污染。
4、請使用不含RNA酶或DNA酶的槍頭、EP管進行試驗。
5、建庫所使用的RNA必須是純化后質(zhì)檢合格的樣本，否則會嚴重影響建庫結(jié)果；
6、實驗所用磁珠應(yīng)提前30分鐘自4℃環(huán)境中取出，平衡至室溫。所有磁珠操作均需置于室溫。
7、80%乙醇需現(xiàn)配現(xiàn)用，用其清洗磁珠后，需清除干凈，避免對后續(xù)反應(yīng)產(chǎn)生影響。
建庫流程
利用oligo dT磁珠，從總RNA純化得到mRNA，經(jīng)過片段化（300bp左右）、合成一鏈和二鏈cDNA，再通過末端修復(fù)、加A、連接接頭和PCR富集得到zui終的cDNA文庫。
Tips：RNA樣品檢測的4種主要方法
(1) 瓊脂糖凝膠電泳分析RNA降解程度以及是否有污染
(2) Nanodrop檢測RNA的純度（OD260/280比值）
(3) Qubit對RNA濃度進行定量
(4) Agilent 2100檢測RNA的完整性
適應(yīng)范圍
樣本種類：動、植物及真菌等真核生物的總RNA
建庫起始量：100ng-1.5μg，推薦RNA RIN值≥7
插入片段：150bp-200bp或250-300bp
注：以1.5μg小鼠總RNA為起始模板，caliper檢測文庫大小分布情況，主峰值在408bp左右
溫馨提示：
（1）RNA純化在室溫條件下操作，RNA樣本稀釋后冰上放置，并盡快進入下一步實驗，避免RNA發(fā)生降解；
（2）RNA打斷條件以及后續(xù)片段篩選需要嚴格按照sop進行，否則會影響文庫大小及產(chǎn)量；
（3）試劑盒中的產(chǎn)品組分，不可拆分，不可與其他品牌同種試劑配套使用，否則影響建庫結(jié)果。
RNA建庫試劑盒注意事項
1、試驗前請仔細閱讀本說明書，注意每個組分的保存溫度，確保實驗順利完成。
2、Stranded Oligo需-80℃保存，使用時少量分裝使用。
3、操作過程請注意避免核酸樣品和產(chǎn)物之間的交叉污染。
4、請使用不含RNA酶或DNA酶的槍頭、EP管進行試驗。
5、建庫所使用的RNA必須是純化后質(zhì)檢合格的樣本，否則會嚴重影響建庫結(jié)果；
6、實驗所用磁珠應(yīng)提前30分鐘自4℃環(huán)境中取出，平衡至室溫。所有磁珠操作均需置于室溫。
7、80%乙醇需現(xiàn)配現(xiàn)用，用其清洗磁珠后，需清除干凈，避免對后續(xù)反應(yīng)產(chǎn)生影響。
