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凍存原代細胞的培養過程

發布時間:2023-11-28瀏覽次數:948返回列表

       原代細胞(primary culture cell)是指從機體取出后立即培養的細胞。有人把培養的第1代細胞與傳10代以內的細胞統稱為原代細胞培養。原代細胞不僅廣泛應用于分子、細胞生物學和生物醫學基礎研究,如蛋白質組學、基因組學、細胞株(系)研究、DNA,RNA和遺傳學研究等。 

凍存原代細胞的培養:

  1.將一管細胞從液氮罐中取出,注意保護手和眼睛。

  2.將凍存管快速的放入37℃水浴中,輕輕握住并旋轉,直到管內物體完全融化。 

  3.將凍存管立即從水浴中拿出,擦干,轉入無菌環境。

  4.用70%的酒精沖洗凍存管,然后擦去多余酒精。

  5.打開蓋子,注意手指不要碰到里面的螺紋(注意,由于凍存管有負壓,開蓋時可能會有少量溢出,這是正常現象)。

  6.用多聚賴氨酸包被培養瓶。多數細胞推薦的接種密度為每平方厘米5000個細胞。

  7.蓋好培養瓶的蓋子,輕輕搖晃培養瓶以使細胞分布均勻。若需要氣體交換可打開蓋子。

  8.將培養瓶放入培養箱中。

  9.放入培養箱后第6-16小時換一次培養基,以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細胞。

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