ELISA試劑盒操可能會出現的問題及解決辦法

  >> 問題顯色淡，靈敏度偏低

  可能原因

  1、試劑盒在運輸途中時間太長，溫度太高

  2、試劑盒未充分平衡

  3、培養箱溫度不足37℃

  4、保溫時間不足

  5、洗滌時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗滌次數增加

  6、移液器吸液量不足，吸嘴內壁掛水太多或內壁不清潔

  7、蒸餾水水質有問題

  8、底物作用時間不足

  問題可能原因解決方法

  盡量縮短運輸時間，夏季應放冰塊降溫

  試劑盒從2～8℃冰箱取出后打開盒蓋，于室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫(約25℃)。

  注意培養箱溫度，放入反應板后盡量減少開啟次數以免影響溫度恒定，非隔水式培養箱尤其應注意

  校正定時鐘準確定時

  按試劑盒說明書要求保留洗滌時間，準確記住洗滌次數

  校正移液器，吸嘴要配套，裝吸嘴時要緊密，吸嘴內壁要清潔，好一次性使用

  使用新鮮合格的蒸餾水

  準確定時

  >> 背景深，全部呈有色

  可能原因

  1、洗滌不充分，洗后未拍干，樣品中其它成分殘留或酶標記物殘留

  2、樣品污染

  3、培養箱溫度超過37℃或反應時間過長

  4、吸嘴重復使用，未洗凈或消毒不

  5、蒸餾水被污染

  6、酶等試劑混用

  7、一次實驗的標本量過多，加樣時間太長，導致實際反應時間延長

  解決方法

  濃縮洗液準確配制;10倍濃縮洗滌液如有結晶則應讓結晶于室溫全部溶解后再量取稀釋;充分洗滌，拍干。加樣或加酶拍板的濾紙應棄去不用，不要反復使用，否則易造成污染

  樣品應新鮮采集，或低溫保存，防止污染

  調整培養箱溫度，準確定時

  吸嘴盡可能一次性使用

  使用新鮮蒸餾水

  不同批號試劑勿混用

  合理安排實驗，避免幾塊酶標板同時加樣

  >> 重復性不佳

  可能原因

  1、樣品數量多少不一，加樣時間有長有短

  2、保溫時間不一致，洗滌條件不一致，操作人員不一致

  3、加樣量不一致

  解決方法

  重復某一樣品時，加樣時間盡可能與次接近

  重復測定標本，操作條件、人員等應盡可能與上次保持一致，以排除這些因素造成的不一致的可能性

  樣品稀釋前應充分混勻，盡可能使用同一移液器并裝緊吸嘴

  >> 出現白板，陽性對照不顯色

  可能原因

  1、顯色液變質

  2、洗滌液配制有誤

  3、未加酶結合物而認為已加入

  4、終止液誤作洗滌液稀釋或當底物液使用

  解決方法

  換新的顯色液

  請按試劑盒說明書所示稀釋倍數配制

  注意不要漏加

  每次加液前均應看清標簽

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