古朵分享：ELISA實驗失敗之后的解決方案

  一：試劑因素

  1. 首先試劑應選擇靈敏度高、特異性好、穩定性好、批間差小、操作方便的試劑。ELISA試劑盒不同廠家的試劑一定不能混用，包括底物和洗滌液。

  2. 由于校準標準有差異，還有抗體、檢測方法、試劑、交叉反應等因素都會導致對樣本的檢測結果不一致。

  如：有的廠家酶標板孔間CV值大于20%，標記酶的活性及顯色液的穩定性比較差，使用劣質的試劑必然導致結果的假陽性或假陰性。

  3. 要注意試劑的批號和出廠日期，雖然試劑的有效期多為1年，選擇剛出廠的試劑盒。避免選擇假的ELISA試劑盒。有些廠家為夸大生產ELISA的指標范圍，用一種指標來冒充其它指標，造成各種種屬、各種指標都可以做的假象。

  4. 比如用TGF beta這樣的指標代替大多數試劑盒的其它指標作為檢測抗體，同樣可以獲得良好的標準曲線。因為TGF beta在大多數哺乳動物中都有廣泛表達，種屬間的氨基酸序列同源性達，TGF beta隨著其他因子的影響，其表達水平也會發生相應的變化，使得實驗者難以查覺。

  在分析完以上可能出現的因素后，專家給到以下鑒別方法，大家可以直接去搜索如何鑒別真假ELISA試劑盒。

  1.利用干擾實驗可辨別ELISA試劑盒是否檢測目的抗原。

  2.如果購買了同一公司的ELISA試劑盒A和B，利用交叉實驗可辨別ELISA試劑盒真偽。

  3.指標本身也可以鑒定試劑盒的真偽。

  2.標本因素和操作因素

  血清是常用的ELISA標本，血漿一般可視為與血清同等的標本，標本引起的假陽性和假陰性結果主要是干擾性物質所致，分為內源性物質和外源性物質兩種：

  二：內源性物質

  有人認為大約40%的人血清標本中含有非特異性干擾物質，ELISA試劑盒可以不同程度影響檢測結果。常見的干擾物質有：類風濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫源性誘導的抗鼠Ig(s)抗體、交叉反應物質和其它物質等。

  三：外源性物質

  外源性物質常常是由于用于ELISA測定的血標本的采集、貯存等不當所致。如標本溶血、標本被細菌污染、標本貯存過久、標本凝集不全和采血管中添加物等影響。

  所以，當ELISA測定結果與預期或文獻報導中不一致時，應該首先考慮試劑因素，這個是做好實驗獲得正確數據的前提保證，其次還有標本因素和操作因素等多方面進行分析，并應采取相應措施排除干擾作用，從而為實驗提供正確可靠的檢測結果。

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