冰凍切片活性氧檢測試劑盒是一種利用熒光探針O12進行活性氧檢測的試劑盒。O12本身沒有熒光,被活性氧特異性氧化生成綠色熒光物質,綠色熒光強度與活性氧水平成正比,檢測綠色熒光就可以知道組織內活性氧的水平。在激發波長500nm,發射波長525 nm附近,使用熒光顯微鏡/激光共聚焦檢測綠色熒光,從而測定組織內活性氧水平。...

產品特點：

● 使用方便：可用熒光顯微鏡直接觀察；

● 背景低,靈敏度高；

● 線性范圍寬,使用方便。

檢測方法：

● 熒光顯微鏡 ● 激光共聚焦顯微鏡

樣本類型：

● 新鮮冰凍切片

試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：

● 熒光顯微鏡/激光共聚焦顯微鏡,激發波長488-535nm,發射波長525±15nm。

● 離心機 ● 移液器 ● PBS或者HBSS（無酚紅)

使用注意事項：

● 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內壁上的液體收集至管底,避免開蓋時液體灑落。

● 盡量縮短探針標記后到測定所用的時間,以減少各種可能的誤差。

● 對于某些樣本,如果熒光太強,可以按照1:200-1:1000稀釋探針。探針標記的時間也可以根據情況在20-60分鐘內適當進行調整。

● 以下操作步驟僅供參考,請根據實際樣本情況調整。

使用方法：

一、 試劑配制

1、根據樣本數,用純水將O12活性氧熒光探針200倍稀釋,配成染色工作液。

2、用純水將10×清洗液10倍稀釋,配成1×清洗液工作液。

二、探針標記

1、準備待測的厚為10μm的未經固定處理的冰凍切片。

【注】:

● 建議使用新鮮組織（手術切除后1小時內)制成的冰凍切片。

2、室溫下,小心加上200μL清洗液工作液,鋪滿整個切片表面,靜置5-10分鐘。

3、小心吸除清洗液。

4、滴加100μL染色工作液,在37℃培養箱避光孵育20-60分鐘。

【注】:

● 最好在濕盒中孵育,避免液體蒸發。

5、移除染色液。

6、用PBS洗滌切片2-3次。

7、加蓋玻片或甘油封片。

8、熒光顯微鏡檢測。

【注】:

● 染色完成后,立即進行熒光定性分析。

● 激發波長488nm,發射波長525nm。

● 熒光增強,表明活性氧（ROS)含量高。

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