MTS溶液可以直接加入到細胞樣品中，不需要預配各種成分，MTS溶液很穩(wěn)定，對細胞沒有毒性，可以長時間孵育細胞。MTS法測定細胞增殖或毒性試驗中活細胞數(shù)目的靈敏度高，無放射性，檢測細胞增殖實驗的靈敏度比其它方法如MTT, XTT和WST-1高。...

產(chǎn)品特點：

● 易于使用：直接將MTS溶液，加入到細胞中，孵育然后讀取吸光度值。

● 快速：在96孔板中進行檢測，不需洗滌或收獲細胞。也不需要溶解步驟。因為MTS甲臢產(chǎn)物可溶解在組織培養(yǎng)基中。

● 非放射性：不需液閃混合液，不需處理放射性廢物（不像[3H]-胸腺嘧啶）。

● 靈活：平板被讀數(shù)后還可以放回溫箱繼續(xù)顏色反應（不像MTT）。

● 安全：不需要揮發(fā)性有機溶劑來溶解甲臢化合物（不像MTT）。

應用：

● 細胞增殖；細胞毒性；凋亡結果 ● 化學靈敏性 ● 細胞貼附確定；趨化性

樣本類型：

● 懸浮細胞 ● 貼壁細胞

試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：

● 帶有450nm波長的酶標儀/分光光度計 ● CO₂培養(yǎng)箱 ● 離心機 ● 移液器 ● 96孔培養(yǎng)板

● PBS緩沖液 ● HBSS

使用注意事項：

● 需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復凍融，否則將會增加空白吸收，從而影響檢測結果。最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。

● 用培養(yǎng)基或PBS來配制待檢測藥物。

● 如果待測藥物有還原性，則測定不含細胞，僅含有MTS的待測藥物溶液在490nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入MTS,如果吸光度相對較大,則需要除去培養(yǎng)基，并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細胞兩次,然后加入新的100μL培養(yǎng)基和10μL MTS進行檢測。

● 細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。

● 加MTS 溶液后孵育時間的長短根據(jù)細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定，對于大多數(shù)情況孵育1 小時即可，白細胞需要培養(yǎng)較長時間。

● 如果不是使用96 孔板檢測，MTS 溶液的用量相應等比例增加即可。

活性測定使用方法：

1、收集細胞，加細胞懸液100μL（約5000-10000個細胞）到96孔板（邊緣孔用無菌水或PBS填充）。每板設對照（加100μL培養(yǎng)基）。

2、置37℃，5% CO₂孵育過夜，倒置顯微鏡下觀察。

3、每孔加入10μL待檢測藥物溶液，37℃孵育。

【注】：

● 此處以藥物處理細胞為例，實際以自己的細胞樣品為準。

● 用各種方法制備的細胞模型按下面方法加入MTS試劑后檢測即可。

4、每孔加入10μL MTS 溶液，37℃孵育1-4小時。

【注】：

● 此處以96孔板加樣為例，實際檢測時以自己的細胞培養(yǎng)容器為準。

● 按培養(yǎng)基的用量的10%比例添加MTS試劑即可。

5、測定490nm各孔的吸光值。

6、同時設置空白孔（培養(yǎng)基和MTS溶液，無細胞），對照孔（不加藥培養(yǎng)基和MTS溶液，有細胞），每組設定3-5復孔。

【注】：

● 復孔數(shù)量根據(jù)自己實際需要設定，為了降低試劑消耗成本，可以少設復孔。

結果分析：

細胞活力計算：

將各測試孔的OD值減去調(diào)零孔OD值或?qū)φ湛譕D值。各重復孔的OD值取平均數(shù)。

細胞活力% =（加藥細胞OD-空白OD/對照細胞OD-空白OD）×100

數(shù)量測定使用方法：

1、先用細胞計數(shù)板計數(shù)所制備的細胞懸液中的細胞數(shù)量，然后接種細胞。

2、按比例(例如：1/2 比例)依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細胞濃度梯度，一般要做3-5個細胞濃度梯度，每組3-6個復孔。

3、接種后培養(yǎng)2-4小時使細胞貼壁，然后加MTS試劑培養(yǎng)一定時間后測定OD值，制作出一條以細胞數(shù)量為橫坐標(X軸)，OD值為縱坐標(Y軸)的標準曲線。根據(jù)此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數(shù)量 (使用此標準曲線的前提條件是實驗的條件要一致，便于確定細胞的接種數(shù)量以及加入MTS后的培養(yǎng)時間)。

常見問題：

● 檢測時需要換液嗎？

如果待測藥物有還原性，需要換液，否則不需要。

● 如何判斷待測藥物是否含有還原性？

測定不含細胞，僅含有待測藥物的溶液加入MTS反應后的在490nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，說明待測藥物沒有還原性或還原性很小，對MTS沒有影響，則可以不換液，在培養(yǎng)基中直接加入MTS；如果吸光度相對較大，說明藥物具有較強的還原性，則需要除去含藥物的培養(yǎng)基，并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細胞兩次，然后加入新的100μL培養(yǎng)基和10μL MTS進行檢測。

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