Fluo-3,AM熒光探針采用可見光激發(fā),與傳統(tǒng)的紫外光激發(fā)的熒光探針相比,儀器的適用范圍更廣泛,具有更強(qiáng)的探針吸收性能,使得更低濃度的探針即可成功檢測(cè)Ca2+變化,從而降低了對(duì)活細(xì)胞的光毒性,檢測(cè)敏感度更高。...

檢測(cè)方法：

● 流式細(xì)胞儀 ● 熒光顯微鏡 ● 激光共聚焦

樣本類型：

● 懸浮細(xì)胞 ● 貼壁細(xì)胞

試劑盒以外自備試劑和儀器：

● 激光共聚焦/流式細(xì)胞儀/熒光酶標(biāo)儀/熒光顯微鏡等 ● 離心機(jī) ● HBSS(無酚紅) ● PBS(1×,pH7.4)

使用注意事項(xiàng)：

● 螺旋蓋微量管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底,避免開蓋時(shí)液體灑落。

● 探針為了便于觀察防止誤操作導(dǎo)致?lián)p失,在試劑盒中時(shí)是采用透明管包裝,收到后可以離心轉(zhuǎn)入干燥黑色避光密封或者用鋁箔包裹避光。

● 熒光染料均存在淬滅問題,請(qǐng)盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。

● 細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。

● 染色后立即進(jìn)行分析。

● Fluo-3,AM探針容易受潮,穩(wěn)定性較差,注意干燥保存。從冰箱取出后,請(qǐng)確認(rèn)在干燥的環(huán)境放至室溫后再開封。

● Fluo-3,AM探針母液時(shí)要用干燥的新吸頭,不能使用含水的吸頭。

● 未使用完的Fluo-3,AM探針母液請(qǐng)擰緊螺旋蓋,避免受潮失效。母液遇水極易分解,如果長(zhǎng)期不用,建議根據(jù)每次使用量分裝保存,用封口膜封口,并用鋁箔紙包裹,放在一個(gè)密閉性能好的塑料袋中,并放入一包干燥劑,在≤-20℃密閉避光保存。

● Fluo-3,AM探針工作液含水,配制后不可以長(zhǎng)期保存,需現(xiàn)配現(xiàn)用。

● Fluo-3,AM融解后離心至管底部再打開螺旋蓋,防止開蓋時(shí)損失。

● 可在染色溶液中加入等體積的20% Pluronic F127溶液(可選步驟),Pluronic F127可以幫助Fluo-3,AM更快進(jìn)入細(xì)胞,不建議在Pluronic F127中長(zhǎng)期保存Fluo-3,AM溶液。

● 標(biāo)記的條件因細(xì)胞種類而異,根據(jù)不同樣本的實(shí)際染色結(jié)果做相應(yīng)調(diào)整,在每次實(shí)驗(yàn)前,請(qǐng)先確定最佳條件。在正式試驗(yàn)前先摸索一下細(xì)胞量、鈣離子熒光探針的終濃度、培養(yǎng)時(shí)間等,找到最佳實(shí)驗(yàn)條件。以下方法僅供參考。

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