CDCFDA的膜轉(zhuǎn)運和細胞內(nèi)水解的精確動力學與細胞功能有關，因此CDCFDA標記可用于通過流式細胞術或熒光顯微鏡監(jiān)測細胞。CDCFDA染料標記細胞的熒光強度在細胞系之間差異很大，可能是由于細胞內(nèi)酯酶活性的差異導致。...

檢測方法：

● 流式細胞儀 ● 熒光顯微鏡 ● 激光共聚焦

樣本類型：

● 懸浮細胞 ● 貼壁細胞

試劑盒以外自備試劑和儀器：

● 流式細胞儀或熒光顯微鏡或激光共聚焦 ● 離心機 ● PBS緩沖液 ● HBSS(無酚紅)

使用注意事項：

● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

● 染色濃度根據(jù)細胞種類的不同和每孔內(nèi)細胞數(shù)量的多少而異。

● CDCFDA母液易水解，建議分裝保存，分裝后用封口膜密封管口，再用錫箔紙包裹，最后和干燥劑一起用塑料袋密封，≦-20℃冷凍保存。

● CDCFDA工作液應現(xiàn)配現(xiàn)用，不能提前配制，因為CDCFDA吸水會分解，影響染色效果。

● CDCFDA易被水解，在水溶液中會變質(zhì)。母液請在使用過程中避免接觸水。工作液在標記細胞的過程中和水接觸是在許可的時間范圍內(nèi)的。

● CDCFDA溶解液在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi)，可以37℃水浴片刻至全部融解后使用。

● CDCFDA標記細胞僅需5-15分鐘即可完成。對于不同細胞，最佳標記時間需自行摸索。正式實驗前，建議先做幾個孔摸索染色濃度和加入CDCFDA試劑后的培養(yǎng)時間。

● 熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

● 以下染色步驟僅供參考。以實際需要使用。也可以原位染色。

使用方法：

1、根據(jù)需要檢測的細胞樣品數(shù)，用HBSS緩沖液將CDCFDA母液500-4000倍稀釋。

不同的細胞需要根據(jù)預實驗結(jié)果確定最佳染色濃度。如果熒光強度弱，可以適當提高CDCFDA的終濃度。如果背景太高，可以適當降低CDCFDA的終濃度，請摸索條件找到最佳濃度。

【注】：

● 也可以用PBS 等緩沖液或相應的無血清培養(yǎng)基稀釋染料母液至所需濃度。

● 開始實驗前，使用HBSS 緩沖液或無血清培養(yǎng)基稀釋CDCFDA到需要的工作濃度。工作濃度為根據(jù)不同細胞的預實驗結(jié)果確定的最佳工作濃度，一般染色終濃度500-4000倍稀釋。

● 一般起始濃度按500-1000倍稀釋即可。

● 為了降低過度加載染料導致的潛在背景和細胞毒性，在不影響實驗結(jié)果的前提下應盡可能低濃度染色。

● 工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。

2、將待測細胞用染色工作液重懸，至細胞濃度大約10⁷/mL。

【注】：

● 貼壁細胞也可原位染色。

3、在37℃培養(yǎng)箱中避光孵育15-30分鐘。

4、離心后去上清，收集細胞，用PBS或無血清培養(yǎng)基洗滌細胞1-2次，最后加入PBS或無血清培養(yǎng)基重懸細胞。

5、取500μL細胞懸液，用激光共聚焦/流式細胞儀檢測。激發(fā)波長為488 nm，最大發(fā)射波長為526 nm。

可以在熒光顯微鏡下直接觀察標記效果，也可以在培養(yǎng)適當時間后再用流式細胞儀檢測細胞，或用于其他特定實驗目的的細胞熒光示蹤。標記的細胞也可以用于活體動物的移植，并用熒光進行示蹤。標記的細胞呈綠色熒光。

6、隨后還可按照細胞的正常培養(yǎng)方法進行培養(yǎng)。

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