DNA非變性加樣緩沖液(2×)由北京百奧萊博供貨并提供相關技術服務支持，本品用于生化實驗研究等領域，本品質量穩定，價位合理，需要DNA非變性加樣緩沖液(2×)等核酸電泳和回收產品的客戶，歡迎您的隨時垂詢。...

特別提示：包括DNA非變性加樣緩沖液(2×)在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：DNA非變性加樣緩沖液(2×)
產品貨號：GL1148
產品規格：5ml

用途：
非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離DNA

注意事項：
主要由50mM Tris-HCL、50mM EDTA、甘油等組成。

儲存條件：4℃，12個月

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貨號	名稱	規格
BTN101222	DNA堿性膠上樣液	1.5mL
BTN90602I	DNA marker(φX174 DNA/Hinc II)	50次
BTN90602G	DNA marker(pBR322/BstN I)	50次
BTN80202	PAGE膠DNA柱式回收試劑盒	50次
WE0246	2kb DNA Marker	100次(500μl)|500次(5×500μl)
RFT001	100bp DNA ladder(100～1500bp)	100T(2×250μl)

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名稱：一站式DNA尿素-PAGE電泳套裝
貨號：BTN90317
規格：30次
本品是專門用于DNA 尿素-PAGE電泳的一站式試劑盒。

產品特點：
1.一站式，即開即用，用戶不需單獨準備各種成分，十分方便。用戶不需要單獨準備各種成分。
2.可用于DNA 測序、AFLP、DDRT、TGGE和RNase 保護實驗等。
3. 安全，免去了實驗人員接觸粉末狀的劇毒物品丙烯酰胺。
4.電泳后可直接用于銀染、EB染色等實驗。

產品組成：

成分	規格	保存
電泳級尿素	210g	常溫
電泳級丙烯酰胺	77.34g	常溫
電泳級甲叉雙丙烯酰胺	2.67g	常溫
10×TBE電泳液	250ml	常溫
電泳級TEMED	1.5ml	4℃，避光
電泳級過硫酸銨	1g	常溫
2×尿素-PAGE上樣液	1ml	-20℃
說明書	1份

儲存條件：常溫運輸，保存條件見上表，有效期一年。

使用方法：

一、PAGE濃度和交聯度的選擇指南
尿素-PAGE一般推薦用29：1(丙烯酰胺：甲叉雙丙烯酰胺)的交聯度，
在此條件下，DNA片段和zuì適PAGE濃度對應關系如下：

單鏈DNA長度	zuì佳PAGE濃度	二甲苯青FF遷移率 對應的長度	溴酚藍的遷移率 對應的長度
50-400nt	8%	160nt	45nt
200-1000nt	5%	260nt	65nt
750-2000nt	3.5%	460nt	100nt

二、制備尿素-PAGE膠
1. 配制尿素-PAGE膠(這是配制100mL膠的用量，配制更大體積的膠則需以此用量為基礎按比例增加)
A：新鮮配制10%的APS(過硫酸銨)：按每0.1 克過硫酸銨干粉加1mL超純水的比例將水加到裝有硫酸銨干粉的1.5mL EP 管中，搖晃到粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。
B：新鮮交聯度為29:1的40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液(AB溶液，下同)：在裝有77.34 g電泳級丙烯酰胺干粉的瓶中加入約120mL自備的去離子水，然后將全部甲叉雙丙烯酰胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來以避免粉末有毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低，不會溶解在這少量溶液中)。充分搖晃混勻后所得溶液即40%的AB溶液。配制40%而非30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
C：配尿素-PAGE膠：在一個250mL的三角瓶中，先按下表的用量加入去離子水、40%AB溶液和10×TBE緩沖液。丙烯酰胺單體溶液具有神經毒性，一定要戴手套操作。

PAGE膠濃度	各成分用量(尿素為克，其余單位是mL)			補水到(mL)
	尿素	40%AB溶液	10×TBE緩沖液
5%	42	12.5	5.0	100
6%	42	15.0	5.0	100
7%	42	17.5	5.0	100
8%	42	20.0	5.0	100
9%	42	22.5	5.0	100
10%	42	25.0	5.0	100
11%	42	27.5	5.0	100
12%	42	30.0	5.0	100

D：攪拌溶解，然后用濾紙過濾。zuì好能抽真空10-15分鐘以去除溶液中的氧氣(氧氣能抑制丙烯酰胺聚合反應)，無條件也可以不脫氧。
E：加入500μL 10%APS和100μL TEMED，迅速搖勻后倒膠。
F:在膠的液面距離達到頂部時停止灌膠，插入梳子。
G:室溫聚合30-60分鐘(低溫抑制聚合反應)。
H: 拔出梳子，用0.5×TEB液沖洗加樣孔。

三、樣品準備
2. 對一般樣品、測序樣品、微衛星DNA、AFLP樣品、DDRT樣品、RPA樣品：將樣品跟上樣液1:1 混合，95℃ 3分鐘變性，然后放冰上待用。
3. 對TGGE樣品：可以直接上樣。

四：電泳
4. 將凝膠板固定在電泳裝置上，往上槽和下槽中加入足夠0.5×TEB電泳液。
5.預電泳5-30分鐘將冰上放置的樣品上樣。
6.連接電源線，打開電源開關。根據膠的大小選擇功率(固定功率可以固定產熱，這樣不容易發生過熱而使膠板破裂的現象。如果固定電流或電壓，產熱都將隨電泳時間而變化，不好控制)。對小膠一般用5-6W 固定功率，大膠用15-25W 固定功率。
7. 終止電泳，取出凝膠進行后續的處理(如銀染)。注意：如果銀染，必須延長固定時間以便讓洗出尿素，否則殘留尿素會干擾后面的銀染。

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