QN2753 兔源一抗免疫組化檢測試劑盒

產品簡介
兔源一抗免疫組化檢測試劑盒由專業試劑供應商北京百奧萊博提供,用于科研試驗,兔源一抗免疫組化檢測試劑盒是我司眾多優質免疫檢測之一,質量堪比同類進口產品,價格非常優惠,目前正熱烈促銷中,恭候您的咨詢訂購。...
產品詳細介紹
特別提示:包括兔源一抗免疫組化檢測試劑盒(FITC熒光+DAB顯色)在內,本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途!
產品名稱:兔源一抗免疫組化檢測試劑盒(FITC熒光+DAB顯色)
英文名稱:SABC Kit-FITC(POD)(Rabbit IgG)
產品貨號:QN2753
產品規格:100T-200T
本試劑盒適合于一抗為兔IgG來源的免疫組化實驗,DAB及FITC顯色。SABC是專為免疫組化和其他免疫檢測而設計的,用以顯示組織和細胞中抗原分布。鏈霉親和素(StreptAvidin)是一種從鏈霉菌中提取的蛋白質,同親和素一樣,對生物素有高的親和力,親和素是一個堿性蛋白質(PI=10),經改造后可以轉變成中性蛋白質。鏈霉親和素等電點接近中性,對組織和細胞的非特異吸附很低,基于鏈霉親和素的免疫組化方法背景很低。SABC即StreptAvidin-Biotin Complex,SABC大約可形成一百個左右的過氧化物酶或者FITC和五十個左右的鏈霉親和素所構成的復合物。大量的酶與FITC將保證SABC具有很高的敏感性。
試劑盒組成:
| 組分 | 規格 |
| 封閉液(5% BSA) | 10ml |
| Bio-羊抗兔IgG濃縮液 | 100μl |
| SABC-FITC濃縮液 | 100μl |
| SABC-POD濃縮液 | 100μl |
| 稀釋液 | 30ml |
| 20×DAB顯色液A | 1ml |
| 20×DAB顯色液B | 1ml |
| 抗熒光衰減封片劑 | 10ml |
保存:-20℃,如經常使用,可將封閉液,稀釋液,20×DAB顯色液B和抗熒光衰減封片劑存放于2~8℃以方便使用。
操作步驟(以石蠟切片熱修復為例):
1.切片常規脫蠟至水。3% H2O2室溫5~10分鐘以滅活內源性酶(如果FITC,可省掉此步)。蒸餾水洗3次。
2.熱修復抗原:將切片浸入0.01M枸櫞酸鹽緩沖液(PH6.0),電爐或微波爐加熱至沸騰后斷電,間隔5~10分鐘后,反復1~2次。冷卻后PBS(pH7.2-7.6)洗滌1~2次。
3.滴加5% BSA封閉液,室溫20分鐘。甩去多余液體,免洗。
4.用稀釋液將一抗按一定比例稀釋(稀釋后的一抗 4℃可保存一周),也可另行購買抗體稀釋液。滴加稀釋的一抗,37℃ 1小時孵育左右或20℃ 2小時左右,也可4℃過夜。PBS(pH7.2~7.4)洗滌3次,每次2分鐘(一抗的稀釋度、孵育時間和溫度與染色強度、背景有直接關系。一般來說,陽性染色強度不夠時,可提高一抗濃度和延長孵育時間;背景過高時,可降低一抗濃度和縮短孵育時間)。
5.根據使用量,用稀釋液將bio-羊抗兔IgG濃縮液按1:100稀釋成工作液(1ml稀釋液加入10μl bio-羊抗兔IgG濃縮液,混勻即成工作液,此工作液4℃可保存一周)。滴加生物素化羊抗兔IgG工作液,20~37℃處理30分鐘。PBS(pH7.2~7.4)洗滌3次,每次2分鐘。
如果用熒光觀察,請接步驟6、7,如果用DAB顯色,請直接轉至步驟8。
6.根據使用量,用稀釋液將SABC-FITC濃縮液按1:100稀釋成工作液(1ml稀釋液加入10μl SABC-FITC濃縮液,混勻即成SABC-FITC工作液。此工作液4℃可保存一周)滴加SABC-FITC工作液,20~37℃,30分鐘(避光)。PBS(pH7.2~7.4)洗滌4次,每次5分鐘。
7.滴加抗熒光衰減封片劑封片。熒光顯微鏡觀察。
8.根據使用量,用稀釋液將SABC-POD濃縮液按1:100稀釋成工作液(1ml稀釋液加入10μl SABC-POD濃縮液,混勻即成SABC-POD工作液。此工作液4℃可保存一周),滴加SABC-POD工作液,20~37℃,30分鐘。PBS(pH7.2~7.4)洗滌4次,每次5分鐘。
9.DAB顯色:根據用量,用PBS(pH7.2~7.4)配制,按1ml PBS加入50μl 20×DAB顯色液A,加入50μl 20×DAB顯色液B,混勻后加至切片。室溫顯色,鏡下控制反應時間,一般在5~30分鐘之間。蒸餾水洗滌終止反應。
10.蘇木素輕度復染。脫水,透明,封片。顯微鏡觀察。
對于細胞爬片:常規固定后,PBS漂洗兩次,再用0.5% Txiton X-100室溫20分鐘,PBS漂洗兩次,3% H2O2(如果用FITC,剛可省掉此步)處理15分鐘;PBS漂洗兩次,下接上面第4步。
對于冰凍切片:固定后,可用PBS漂洗兩次,再接上面第二步。
注意事項:
1.如果用DAB染色背景過高,在SABC反應之后,DAB顯色之前,用加有0.01~0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2~7.4)洗滌切片4次,PBS洗2次,然后DAB顯色。
2.如果用FITC觀察背景過高,在SABC反應之后,用加有0.01~0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2~7.4)洗滌切片4次,PBS洗滌2次,然后封片觀察。
3.因為免疫組化指標眾多,標本不一,此步驟僅作參考。
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