磁珠法口腔拭子DNA提取試劑盒由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品僅用于生物化學(xué)研究方面，我公司的磁珠法口腔拭子DNA提取試劑盒品質(zhì)上佳，經(jīng)過多年的開發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括磁珠法口腔拭子DNA提取試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：磁珠法口腔拭子DNA提取試劑盒
英文名稱：Magbead Swab DNA Extraction Kit
產(chǎn)品貨號：WE0209
產(chǎn)品規(guī)格：96次

  本試劑盒提供了一種簡單、快速、的口腔拭子DNA提取方法，適用于從干燥保存或在保護(hù)液中保存的口腔拭子中提取基因組DNA。在高鹽存在時(shí)，DNA結(jié)合于硅基包被的Magbeads表面。漂洗后，高純度的DNA被洗脫于Buffer EB或去離子水中。純化得到的DNA純度好(A260/280的比值在1.7-1.9之間)，完整度高(>15 kb)，可用于二代測序、定量PCR、芯片檢測等下游實(shí)驗(yàn)。

試劑盒組成：

組份	96次
Buffer WL	36ml
Buffer ML	36ml
Buffer GW1(濃縮液)	80ml
Buffer GW2(濃縮液)	50ml
Buffer EB	30ml
蛋白酶K	2×25mg
蛋白酶K 儲存液	2×1.25ml
Magbeads PN	1ml

自備儀器及試劑：

1、手動單管操提取：
1)恒溫混勻儀
2)2/15ml磁力架
3)異丙醇、無水乙醇

2、手動96孔深孔板提取：
1)恒溫混勻儀
2)廢液抽吸系統(tǒng)
3)手動連續(xù)分液器
4)電動連續(xù)分液器
5)手動連續(xù)分液器分液管
6)96孔深孔板磁力架
7)異丙醇、無水乙醇

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備及重要注意事項(xiàng)：
1、向蛋白酶K 中加入用量(1.25ml/25mg)的蛋白酶K 儲存液使其溶解，-20℃保存。配置好的蛋白酶K 勿長時(shí)間室溫放置，避免反復(fù)凍融，以免影響其活性。
2、Magbeads嚴(yán)禁冰凍、離心。冰凍和離心可能會對Magbeads造成不可逆的損害。
3、Magbeads使用前需渦旋震蕩20秒使其充分混勻。
4、次使用前應(yīng)按試劑瓶標(biāo)簽在Buffer GW1和Buffer GW2中加入無水乙醇并做好標(biāo)記。
5、實(shí)驗(yàn)過程中，磁珠在溶液中的充分混勻?qū)τ谔崛〉牡寐逝c純度都有很大的影響。實(shí)驗(yàn)過程中務(wù)必使磁珠與溶液充分混勻。不同廠家生產(chǎn)的恒溫混勻儀震蕩混勻效果有一定差異，實(shí)驗(yàn)過程中請注意觀察磁珠狀態(tài)。如出現(xiàn)磁珠貼壁等未充分混勻的現(xiàn)象，請用移液器吹吸混勻或調(diào)整震蕩頻率

操作步驟：

I、手動單管操作：

方案一(用于從干燥保存的口腔拭子中提取基因組DNA)：
1、將口腔拭子的棉簽用剪刀從桿上剪下，置于2.0ml的離心管中。
2、向離心管中加入20μl 蛋白酶K 和300μl Buffer WL，之后將離心管放于56℃、1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩裂解30分鐘。
注意：如無恒溫混勻儀，將離心管我選振蕩10秒后放于56℃水浴鍋中孵育30分鐘，期間每隔5分鐘渦旋振蕩10秒鐘。
3、將離心管從恒溫混合儀上取下，短暫離心后加入300μl Buffer ML。之后將離心管放于56℃、1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩裂解10分鐘。
注意：如無恒溫混勻儀，將離心管我選振蕩10秒后放于56℃水浴鍋中孵育30分鐘，期間每隔5分鐘渦旋振蕩10秒鐘。
4、將步驟3中的離心管短暫離心后室溫放置5分鐘，之后將裂解產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至1.5ml的離心管中。向離心管中加入200μl異丙醇和10μl充分混勻的Magbeads，渦旋震蕩5秒鐘后將離心管放于25℃、1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩混勻5分鐘或?qū)㈦x心管連續(xù)顛倒混勻10分鐘。
5、將離心管放于磁力架上靜置1分鐘，待Magbeads完全吸附于離心管側(cè)壁后徹底棄去溶液(保持離心管固定于磁力架上)。
6、將離心管從磁力架上取下，加入750μl Buffer GW1(使用前請檢查是否已加入無水乙醇)后渦旋點(diǎn)震1分鐘或渦旋震蕩5秒鐘后放于25℃、1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩混勻2分鐘(震蕩過程中確保Magbeads處于混勻狀態(tài))。之后將離心管放于磁力架上靜置1分鐘，待Magbeads完全吸附于離心管側(cè)壁后輕輕顛倒磁力架將離心管蓋上的雜質(zhì)洗落后徹底棄去溶液(保持離心管固定于磁力架上)。
7、重復(fù)步驟6。
8、將離心管從磁力架上取下，加入750μl Buffer GW2(使用前請檢查是否已加入無水乙醇)后渦旋點(diǎn)震1分鐘或渦旋震蕩5秒鐘后放于25℃、1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩混勻2分鐘(震蕩過程中確保Magbeads處于混勻狀態(tài))。之后將離心管放于磁力架上靜置1分鐘，待Magbeads完全吸附于離心管側(cè)壁后輕輕顛倒磁力架將離心管蓋上的雜質(zhì)洗落后徹底棄去溶液(保持離心管固定于磁力架上)。
9、重復(fù)步驟8。
10、保持離心管固定于磁力架上，用移液器進(jìn)一步去除離心管管底和管蓋上的溶液，之后室溫放置5-10分鐘，使乙醇揮發(fā)干凈。
注意：如果離心管側(cè)壁上有液珠，可向離心管中加入750μl無水乙醇，蓋蓋后顛倒離心管(保持離心管固定于磁力架上)，之后徹底棄去無水乙醇。
11、將離心管從磁力架上取下，加入30-100μl Buffer EB。渦旋震蕩使磁珠完全懸浮于洗脫液中后將其放于56℃、1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩洗脫10分鐘，或?qū)㈦x心管放于56℃水浴鍋中孵育10分鐘，期間每隔3分鐘渦旋震蕩10秒鐘。
12、將離心管放于磁力架上靜置2分鐘，待Magbeads完全吸附于離心管側(cè)壁后用移液器將洗脫液轉(zhuǎn)移至新的離心管中-20℃保存?zhèn)溆谩?br />
方案二(用于從在保護(hù)液中保存的口腔拭子中提取基因組DNA)：
1、將口腔拭子的棉簽從桿上剪下，置于2.0ml的離心管中。
2、向離心管中加入20μl 蛋白酶K 、300μl保存該拭子的保護(hù)液和200μl Buffer ML，之后將離心管放于56℃、1600 rpm的恒溫混合儀上震蕩裂解30分鐘。
注意：如無恒溫混勻儀，將離心管我選振蕩10秒后放于56℃水浴鍋中孵育30分鐘，期間每隔5分鐘渦旋振蕩10秒鐘。
3、將離心管從從恒溫混合儀上取下，室溫放置5分鐘。短暫離心后，將裂解產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至1.5ml的離心管中。
4、向離心管中加入300μl異丙醇和10μl充分混勻的Magbeads，渦旋震蕩5秒鐘后將離心管放于25℃、1600 rpm的恒溫混合儀上震蕩混勻5分鐘或?qū)㈦x心管連續(xù)顛倒混勻10分鐘。
5、將離心管放于磁力架上靜置1分鐘，待Magbeads完全吸附于離心管側(cè)壁后充分棄去溶液(保持離心管固定于磁力架上)。
6、將離心管從磁力架上取下，加入750μl Buffer GW1(使用前請檢查是否已加入無水乙醇)后渦旋點(diǎn)震1分鐘或渦旋震蕩5秒鐘后放于25℃、1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩混勻2分鐘(震蕩過程中確保Magbeads處于混勻狀態(tài))。之后將離心管放于磁力架上靜置1分鐘，待Magbeads完全吸附于離心管側(cè)壁后輕輕顛倒磁力架將離心管蓋上的雜質(zhì)洗落后徹底棄去溶液(保持離心管固定于磁力架上)。
7、重復(fù)步驟6。
8、將離心管從磁力架上取下，加入750μl Buffer GW2(使用前請檢查是否已加入無水乙醇)后渦旋點(diǎn)震1分鐘或渦旋震蕩5秒鐘后放于25℃、1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩混勻2分鐘(震蕩過程中確保Magbeads處于混勻狀態(tài))。之后將離心管放于磁力架上靜置1分鐘，待Magbeads完全吸附于離心管側(cè)壁后輕輕顛倒磁力架將離心管蓋上的雜質(zhì)洗落后徹底棄去溶液(保持離心管固定于磁力架上)。
9、重復(fù)步驟8。
10、保持離心管固定于磁力架上，用移液器進(jìn)一步去除離心管管底和管蓋上的溶液，之后室溫放置5-10分鐘，使乙醇揮發(fā)干凈。
注意：如果離心管側(cè)壁上有液珠，可向離心管中加入750μl無水乙醇，蓋蓋后顛倒離心管(保持離心管固定于磁力架上)，之后徹底棄去無水乙醇。
11、將離心管從磁力架上取下，加入30-100μl Buffer EB。渦旋震蕩使磁珠完全懸浮于洗脫液中后將其放于56℃、1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩洗脫10分鐘，或?qū)㈦x心管放于56℃水浴鍋中孵育10分鐘，期間每隔3分鐘渦旋震蕩10秒鐘。
12、將離心管放于磁力架上靜置2分鐘，待Magbeads完全吸附于離心管側(cè)壁后用移液器將洗脫液轉(zhuǎn)移至新的離心管中-20℃保存?zhèn)溆谩?br />
II、手動96孔板操作：

方案三(用于在96孔深孔板中從干燥保存的口腔拭子中提取基因組DNA)：
1、將口腔拭子棉簽剪下放入96孔深孔板(簡稱“深孔板”)中并記錄每個(gè)孔中樣品名稱。
2、向加入口腔拭子的深孔板中用電動連續(xù)分液器或8通道移液器加入20μl 蛋白酶K 和 300μl Buffer WL，之后將深孔板放于100℃(該恒溫混勻儀為懸空加熱，裂解液實(shí)際溫度在50-60℃之間)、1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩孵育30分鐘。
3、將深孔板從恒溫混勻儀上取下，加入300μl Buffer ML。之后，將深孔板放于100℃(該恒溫混勻儀為懸空加熱，裂解液實(shí)際溫度在50-60℃之間)、1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩孵育10分鐘。
4、將深孔板從恒溫混合儀上取下，把裂解產(chǎn)物按照順序轉(zhuǎn)移至新的深孔板中。
5、向新的深孔板中加入210μl充分混勻的異丙醇(200μl)與Magbeads(10μl)混合物。之后將深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒溫混合儀上震蕩混勻5分鐘。
6、將深孔板從恒溫混勻儀上取下后放于96孔板磁力架上靜置2分鐘。用廢液抽吸系統(tǒng)或8通道移液器棄去溶液，期間避免槍頭接觸磁珠。
注意：用廢液抽吸系統(tǒng)去除溶液時(shí)，需將真空泵調(diào)節(jié)至較小的負(fù)壓值，使溶液以一個(gè)合適的速度被吸走，速度過快容易造成磁珠的流失。
7、用手動連續(xù)分液器向深孔板中加入500μl Buffer GW1(加入前檢查是否已加入無水乙醇)，之后將深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩混勻2分鐘。
8、將深孔板從恒溫混勻儀上取下后放于96孔板磁力架上靜置2分鐘。用廢液抽吸系統(tǒng)或8通道移液器棄去溶液，期間避免槍頭接觸磁珠。
9、重復(fù)步驟7-8。
10、用手動連續(xù)分液器向深孔板中加入500μl Buffer GW2(加入前檢查是否已加入無水乙醇)，之后將深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩混勻3分鐘。
11、將深孔板從恒溫混勻儀上取下后放于96孔板磁力架上靜置2分鐘。用廢液抽吸系統(tǒng)或8通道移液器棄去溶液，期間避免槍頭接觸磁珠。
12、重復(fù)步驟10-11。
13、用手動連續(xù)分液器向96孔深孔板中加入500μl無水乙醇，之后將深孔板固定于25℃、 1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩混勻1分鐘。
14、將板從恒溫混勻儀上取下后放于96孔板磁力架上靜置2分鐘。用廢液抽吸系統(tǒng)或8通道移液器棄去溶液，期間避免槍頭接觸磁珠。
15、保持深孔板固定于96孔板磁力架上，將深孔板倒置于干凈的吸水紙上放置2分鐘。之后將深孔板從96孔板磁力架上取下放于100℃、1600 rpm的恒溫混勻儀上靜置5分鐘。
16、用電動連續(xù)分液器或8通道移液器向深孔板加入50-100μl Buffer EB，之后將深孔板放于100℃(因該恒溫混勻儀為懸空加熱，洗脫液實(shí)際溫度在50-60℃之間)、 1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩混勻10分鐘。
17、將深孔板從恒溫混勻儀上取下后放于96孔板磁力架上靜置2分鐘，用8通道移液器溶液轉(zhuǎn)移至96孔PCR板中蓋蓋后-20℃保存?zhèn)溆谩?br />
方案四(用于在96孔深孔板中從在保護(hù)液中保存的口腔拭子中提取基因組DNA)
1、將口腔拭子棉簽剪下放入96孔深孔板(簡稱“深孔板”)中并記錄每個(gè)孔中樣品名稱。
2、向加入口腔拭子的深孔板中用電動連續(xù)分液器或8通道移液器加入20μl 蛋白酶K 、300μl保護(hù)該拭子的保護(hù)液和200μl Buffer ML，之后將深孔板放于100℃(該恒溫混勻儀為懸空加熱，裂解液實(shí)際溫度在50-60℃之間)、1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩孵育30分鐘
3、將深孔板從恒溫混勻儀上取下，把裂解產(chǎn)物按照順序轉(zhuǎn)移至新的深孔板中。
4、向新的深孔板中加入310μl充分混勻的異丙醇(300μl)與Magbeads(10μl)混合物。之后將深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒溫混合儀上震蕩混勻5分鐘。
5、將深孔板從恒溫混勻儀上取下后放于96孔板磁力架上靜置2分鐘。用廢液抽吸系統(tǒng)或8通道移液器棄去溶液，期間避免槍頭接觸磁珠。
注意：用廢液抽吸系統(tǒng)去除溶液時(shí)，需將真空泵調(diào)節(jié)至較小的負(fù)壓值，使溶液以一個(gè)合適的速度被吸走，速度過快容易造成磁珠的流失。
6、用手動連續(xù)分液器向深孔板中加入500μl Buffer GW1(加入前檢查是否已加入無水乙醇)，之后將深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩混勻2分鐘。
7、將深孔板從恒溫混勻儀上取下后放于96孔板磁力架上靜置2分鐘。用廢液抽吸系統(tǒng)或8通道移液器棄去溶液，期間避免槍頭接觸磁珠。
8、重復(fù)步驟6-7。
9、用手動連續(xù)分液器向深孔板中加入500μl Buffer GW2(加入前檢查是否已加入無水乙醇)，之后將深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩混勻3分鐘。
10、將深孔板從恒溫混勻儀上取下后放于96孔板磁力架上靜置2分鐘。用廢液抽吸系統(tǒng)或8通道移液器棄去溶液，期間避免槍頭接觸磁珠。
12、用手動連續(xù)分液器向96孔深孔板中加入500μl無水乙醇，之后將深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩混勻1分鐘。
13、將板從恒溫混勻儀上取下后放于96孔板磁力架上靜置2分鐘。用廢液抽吸系統(tǒng)或8通道移液器棄去溶液，期間避免槍頭接觸磁珠。
14、保持深孔板固定于96孔板磁力架上，將深孔板倒置于干凈的吸水紙上放置2分鐘。之后將深孔板從96孔板磁力架上取下放于100℃、1600 rpm的恒溫混勻儀上靜置5分鐘。
15、用電動連續(xù)分液器或8通道移液器向深孔板加入50-100μl Buffer EB，之后將深孔板放于100℃(因該恒溫混勻儀為懸空加熱，洗脫液實(shí)際溫度在50-60℃之間)、1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩混勻10分鐘。
16、將深孔板從恒溫混勻儀上取下后放于96孔板磁力架上靜置2分鐘，用8通道移液器溶液轉(zhuǎn)移至96孔PCR板中蓋蓋后-20℃保存?zhèn)溆谩?br />
儲存條件：室溫(15～30℃)

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