血液總RNA提取試劑盒的品牌是百奧萊博，是優質的RNA提取純化產品，本制品僅用于生物化學研究方面，本產品質量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多血液總RNA提取試劑盒等RNA提取純化產品請聯系我司咨詢訂購。...

特別提示：包括血液總RNA提取試劑盒在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：血液總RNA提取試劑盒
英文名稱：High efficiency extraction kit for total RNA from blood
產品貨號：WH0047
產品規格：50次

本試劑盒可從新鮮全血中提取總RNA，可處理不同物種以及多種抗凝劑全血樣品。吸附柱中采用的硅基質材料為本公司特有材料，、專一吸附RNA，可zuì大限度去除雜質蛋白。提取的RNA可用于RT-PCR、Real Time RT-PCR、芯片分析、高通量測序、Northern Blot、Dot Blot、Poly A篩選、體外翻譯、RNase保護分析和分子克隆等多種下游實驗。

產品特點：
·適用于不同物種新鮮全血，操作簡單。
·配有CS過濾柱，可有效去除雜質。
·精心配置的緩沖液，保證RNA提取穩定，適用于多種下游實驗。
·操作安全可靠，無需酚/lǜ仿抽提。

提取實例：

加入不同抗凝劑的新鮮大鼠血100μl，洗脫體積50μl，RNA上樣4～6μl。


新鮮小鼠血液100μl，洗脫體積50μl，RNA上樣4～6μl。

試劑盒組成：

組分	50T
10×紅細胞裂解液H	60ml
裂解液RLH	30ml
去蛋白液RW1H	24ml
漂洗液RW	12ml
RNase-Free ddH2O（瓶裝)	15ml
RNase-Free吸附柱CR4（含2ml收集管)	50套
RNase-Free過濾柱CS（含2ml收集管)	50套
DNase I	1500U
緩沖液RDD	4ml
RNase-Free ddH2O（管裝)	1ml
RNase-Free離心管（1.5ml)	50個

保存條件：室溫（15-25℃）保存，DNaseI，緩沖液RDD，2-8℃保存，加入β-巰基乙醇的裂解液RLH 4℃可放置一個月

自備試劑：β-巰基乙醇、無水乙醇

預防RNase污染，應注意以下幾方面：
1.經常更換新手套。因為皮膚經常帶有細菌，可能導致RNase污染。
2.使用無RNase的塑料制品和槍頭避免交叉污染。
3.RNA在裂解液RLH中時不會被RNase降解。但提取后繼續處理過程中應使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4h，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10min，然后用水徹底清洗，再滅菌，即可去除RNase。
4.配制溶液應使用RNase-free ddH2O。（將水加入到干凈的玻璃瓶中，加入DEPC至終濃度0.1%（ V/V)，混勻后放置過夜，高壓滅菌。)

注意事項：（請務必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項)
1．操作前在RLH中加入β-巰基乙醇至終濃度1%，如1ml RLH中加入10μl β-巰基乙醇。此裂解液zuì好現用現配。配好的RLH 4℃可放置一個月，裂解液RLH在儲存時可能會形成沉淀，如果有沉淀出現，請加熱溶解后使用。
2．次使用前應在漂洗液RW與去蛋白液RW1H中加入無水乙醇，加入量請參見瓶上標簽。
3．人類的血液或體液可能有潛在的感染性，所以如果對人類的全血進行處理，請注意做好防護措施。
4．本試劑盒zuì多能處理1.5 ml健康的人類全血（健康人的全血中白細胞含量為：zuì多4000-7000個白細胞/μl血液)，如果血液中白細胞的含量較高，可按比例減少血液的用量，本試劑盒zuì多可處理的白細胞數量為：1×10⁷。
5．在白細胞裂解后，該說明書中的所有步驟需在室溫（15-25℃)進行，操作速度越快越好。
6．細胞溶解物（在裂解液RLH中)可以存放在-70℃，待使用時，將其置于37℃孵育10min，以保證所有的鹽都溶解，然后進行操作步驟第7步。
7．本試劑盒不適用于凍存的全血。

DNase I儲存液的配制：
將DNase I干粉（1500U)溶解在550 μl RNase-Free ddH2O中，輕柔混勻，分裝后-20℃貯存（可保存9個月)。
注意：從-20℃融化后的DNase I儲存液保存于4℃ （可保存6周)，不要再次凍存。

使用方法：
使用前請先在漂洗液PW中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標簽。

1．紅細胞裂解液的稀釋：根據處理血液樣品的體積選取適當體積的10×紅細胞裂解液H （例如待處理的血液樣品體積為200 μl，則取140 μl 10×紅細胞裂解液H)，用RNase-Free ddH2O稀釋至1×紅細胞裂解液H。
2．向1體積人類全血中加5倍體積1×紅細胞裂解液H （需自備合適的干凈管子)。
  注意：為獲得zuì佳的混勻效果，血液和1×紅細胞裂解液H的混合液體積不應超過管子體積的3/4。如果血液中的白細胞含量較高，可按比例減小血液的使用體積，第6步中的1×紅細胞裂解液H的使用體積也要進行相應調整。
3．在冰上孵育10-15 min，在孵育過程中渦旋振蕩混勻2次。
  注意：在孵育的過程中溶液將變成半透明狀態，表明紅細胞裂解。如果必要的話，孵育時間可延長至20 min。
4．4℃ 2,100rpm （~400×g)離心10min，將上清完全去除。
  注意：離心后白細胞可能會形成小球，確保完全去除上清，痕量紅細胞的存在，會使白細胞小球呈現紅色，而該現象會在隨后的漂洗步驟中消失。
5．向白細胞沉淀中加入1×紅細胞裂解液H （加入1×紅細胞裂解液H的體積是第1步中全血用量的2倍)，重懸細胞。
6．4℃，2,100rpm （~400×g)離心10min，將上清完全去除。
  注意：如果上清去除不完全將會影響裂解及隨后的RNA與膜的結合，導致zuì后RNA產率降低。
7．向白細胞沉淀中加入裂解液RLH （使用前請加入β-巰基乙醇)，具體加量按照下表進行，渦旋或使用移液器混勻。
  注：如果血液不是健康人的全血，需要根據血液中白細胞的數量來確定所需裂解液RLH的體積，此時細胞應完全裂解，塊狀細胞沉淀消失。
  

裂解液RLH	健康人類全血	白細胞數量
350μl	≤0.5ml	≤2×106
600μl	0.5-1.5ml	2×106～1×107

8．將溶液轉移至過濾柱CS中（過濾柱CS放在收集管中)，12000rpm （~13400×g)離心2 min，棄去過濾柱CS，收集濾液。
  注意：為避免氣溶膠的形成，請將移液器調整到≥750μl以保證一次性將所有溶液轉移到過濾柱上，如果細胞太多，將會出現裂解液粘稠的現象，造成難以吸取的情況。
9．向濾液中加入1倍體積70%乙醇（通常為350 μl或600 μl)，混勻（此時可能會出現沉淀)，得到的溶液和沉淀一起轉入吸附柱CR4中（吸附柱CR4放入收集管中)，12000rpm（~13400×g)離心30-60sec，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CR4放回收集管中。
  注意：配制70%乙醇時請使用RNase-Free ddH2O，如果濾液體積有所損失，請相應減少70%乙醇用量。將溶液和沉淀轉移至吸附柱CR4時，體積大于吸附柱容量，可以分兩次完成。
10．如果不進行DNase I消化，可以直接向吸附柱CR4中加入700μl去蛋白液RW1H （使用前請先檢查是否已加入乙醇)，12000rpm （~13400×g)離心30-60 sec，倒掉收集管中的廢液，直接進行步驟14。
  DNase I消化：向吸附柱CR4中加入350 μl去蛋白液RW1H，12000rpm （~13400×g)離心30-60 sec，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CR4放回收集管中。
11．DNase I工作液的配制：取10μl DNase I儲存液放入新的RNase-Free離心管中，加入70 μl RDD溶液，輕柔混勻。
12．向吸附柱CR4中央加入80 μl的DNase I工作液，室溫放置15 min。
13．向吸附柱CR4中加入350 μl去蛋白液RW1H，12000rpm （~13400×g)離心30-60 sec，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CR4放回收集管中。
14．向吸附柱CR4中加入500 μl漂洗液RW （使用前請先檢查是否已加入乙醇)，室溫靜置2 min，12000rpm （~13400×g)離心30-60 sec，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CR4放回收集管中。
15．重復步驟14。
16．12000rpm （~13400×g)離心2 min，倒掉廢液。將吸附柱CR4置于室溫放置數分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。
  注意：離心后將吸附柱CR4在室溫放置片刻，以充分晾干。如果有漂洗液殘留，可能會影響后續的反轉錄，熒光定量等實驗。
17．將吸附柱CR4轉入一個新的RNase-Free離心管中，加入30-50 μl RNase-Free ddH2O室溫放置2 min，12000rpm （~13400×g)離心2 min，得到RNA溶液。
  注意：洗脫緩沖液體積不應少于30 μl，體積過小影響回收效率。RNA溶液請于-70℃保存。

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