人細(xì)小病毒B19核酸檢測(cè)試劑盒由專(zhuān)業(yè)試劑供應(yīng)商北京百奧萊博提供，用于科學(xué)研究，我公司的人細(xì)小病毒B19核酸檢測(cè)試劑盒品質(zhì)上佳，經(jīng)過(guò)多年的開(kāi)發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶(hù)訂購(gòu)。...

特別提示：包括人細(xì)小病毒B19核酸檢測(cè)試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱(chēng)：人細(xì)小病毒B19核酸檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào)：SYA774
產(chǎn)品規(guī)格：48次/盒

人類(lèi)細(xì)小病毒B19是英國(guó)科學(xué)家Cossart及其同事于1977年在篩查無(wú)癥狀乙肝患者血清時(shí)無(wú)意發(fā)現(xiàn)的，根據(jù)生化及分子生物學(xué)特點(diǎn)將其歸為細(xì)小病毒科。由于其是在B組的第19號(hào)樣品中發(fā)現(xiàn)的，故命名為B19病毒。zuì初人們認(rèn)為B19是人群中普遍存在而不致病的一種病毒，但后來(lái)發(fā)現(xiàn)，B19感染是引起傳染性紅斑、慢性溶血性貧血患者發(fā)生再障危象、免疫抑制患者慢性貧血、孕期流產(chǎn)、死胎的病原體。
本試劑盒適用于檢測(cè)人全血等標(biāo)本中的人細(xì)小病毒(B19)DNA，適用于人細(xì)小病毒(B19)感染的輔助診斷，其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒用一對(duì)人細(xì)小病毒B19特異性引物，結(jié)合一條特異性探針，用熒光PCR技術(shù)對(duì)人細(xì)小病毒B19核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)，用于對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。
【試劑組成】
名稱(chēng) 數(shù)量 規(guī)格
核酸提取液 2管 1.5ml
酶液 1管 50μl
B19反應(yīng)液 1管 1.0ml
B19陽(yáng)性質(zhì)控品 1管 50μl
陰性質(zhì)控品 1管 250μl
說(shuō)明：不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
-20℃避光保存、運(yùn)輸、避免反復(fù)凍融，有效期12個(gè)月。
【適用儀器】
ABI系列、MJ系列、Roche系列、博日系列及其他熒光定量PCR檢測(cè)儀。
【標(biāo)本采集】
1. 適用標(biāo)本類(lèi)型：人全血；
2. 標(biāo)本采集：
血液:無(wú)菌注射器抽取外周血1-2ml注入EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管；
【保存和運(yùn)輸】
上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長(zhǎng)期保存可置-70℃，但不能超過(guò)6個(gè)月，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用0℃冰壺。
【使用方法】
1. 樣品處理(樣本處理區(qū))
1.1 樣本前處理
取抗凝血下層(細(xì)胞層)50μl，加入200μl ddH2O使其脹破。
1.2 DNA提取
1) 取上述處理好的標(biāo)本40μl，加入等體積核酸提取液，100℃恒溫處理10分鐘，13000 rpm離心5分鐘，取上清液轉(zhuǎn)移至新的1.5ml EP管，-20℃保存；
2) DNA的提取也可以采用北京百奧萊博科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(離心柱提取法)，請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。
2. 試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))
根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù)，設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1
管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 B19 反應(yīng)液 酶液
用量 20μl 1μl
3. 加樣(樣本處理區(qū))
將步驟1提取的DNA、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取4μl，加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。
4. PCR擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))
4.1 將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量PCR儀反應(yīng)槽內(nèi)；
4.2 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：
步驟 循環(huán)數(shù) 溫度 時(shí)間 收集熒光信號(hào)
1 1 cycle 94℃ 2min 否
2 40 cycle 94℃ 15sec 否
55℃ 30sec 是
反應(yīng)體系為25ul；熒光通道檢測(cè)選擇：FAM通道。
5. 結(jié)果分析判定
5.1 結(jié)果分析條件設(shè)定
1) 設(shè)置基線(xiàn)(baseline)：一般情況下，對(duì)ABI 7500、7700等儀器設(shè)為6-15cycle，對(duì)PE5700設(shè)為3-15cycle,對(duì)MJ Research Option2設(shè)為6-12cycle。特殊情況可對(duì)基線(xiàn)適當(dāng)調(diào)整。
2) 設(shè)置閾值(threshold):以閾值線(xiàn)剛超過(guò)陰性對(duì)照擴(kuò)增曲線(xiàn)(無(wú)規(guī)則的噪音線(xiàn))的zuì高點(diǎn)。
5.2 結(jié)果判斷
1) 陽(yáng)性：檢測(cè)樣本Ct值小于等于35.0，且曲線(xiàn)有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)期；
2) 可疑：檢測(cè)樣本Ct值大于35.0且小于40.0，重復(fù)一次實(shí)驗(yàn)，如果Ct值仍小于40.0，且曲線(xiàn)有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)期，為陽(yáng)性，否則為陰性；
3) 陰性：檢測(cè)不到樣本Ct值或Ct值為40。
6. 對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的解析
實(shí)驗(yàn)室環(huán)境污染，試劑污染，標(biāo)本交叉污染會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果；試劑運(yùn)輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果。
7. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)
1) 陰性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線(xiàn)無(wú)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期或無(wú)Ct值顯示；
2) 陽(yáng)性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線(xiàn)有明顯對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，且Ct值≤32;
以上條件應(yīng)同時(shí)滿(mǎn)足，否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。
【注意事項(xiàng)】
1. 所有操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行；
2. 試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化，混勻并短暫離心；
3. 反應(yīng)液應(yīng)避光保存；
4. 反應(yīng)中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；
5. 使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專(zhuān)用工作服；
6. 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行，以免交叉污染；
7. 實(shí)驗(yàn)完畢后用10%次氯酸或75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器；
8. 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。


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貨號(hào)：SYA186
規(guī)格：48次/盒
一、簡(jiǎn)介：
本試劑盒用一對(duì)呼吸道合胞病毒RSVA型特異性引物，一對(duì)呼吸道合胞病毒RSVB型特異性引物，分別結(jié)合一條特異性熒光探針，用一步法雙重?zé)晒釸T-PCR 技術(shù)對(duì)呼吸道合胞病毒RSVA/RSVB 分型RNA 進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)，用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。本試劑盒中呼吸道合胞病毒RSVA型的探針報(bào)告基團(tuán)為FAM，呼吸道合胞病毒RSVB 型的探針報(bào)告基團(tuán)為VIC/HEX/JOE。

二、用途：
本試劑盒適用于各種咽拭子、鼻拭子樣品等臨床樣品中呼吸道合胞病毒RSVA/RSVB分型的特異性檢測(cè)。適用于呼吸道合胞病毒RSVA/RSVB分型感染的輔助診斷、監(jiān)測(cè)及流行病學(xué)調(diào)查，其檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考。

三、試劑盒組成：(48T)
組份 數(shù)量 規(guī)格
呼吸道合胞A/B反應(yīng)液(RSVA/RSVB-qRT-PCR MIX) 1管 576μL/管
qRT 酶混合物(qRT Enzymes MIX) 1管 192μL/管
無(wú)核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
陰性對(duì)照(NTC) 1管 50μL/管
呼吸道合胞A/B 陽(yáng)性對(duì)照(RSVA/RSVB-PTC) 1管 50μL/管

四、儲(chǔ)存條件及有效期：
本試劑盒于-20℃以下保存，有效期為6個(gè)月。

五、熒光PCR儀器適用范圍：
ABI系列，Roche系列等熒光定量PCR檢測(cè)儀等。

六、樣品的采集與RNA提取
6.1 樣品的采集
按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)采集。標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長(zhǎng)期保存可置-80℃，但不能超過(guò)6個(gè)月，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用0℃冰壺。
6.1.1 血清：用一次性無(wú)菌注射器抽取靜脈血2mL，注入無(wú)菌的干燥玻璃管，室溫(22-25℃)放置30-60min，血標(biāo)本可自發(fā)完成凝集析出血清，或直接使用水平離心機(jī)，3000rpm離心5min，吸取上層血清，轉(zhuǎn)移至1.5mL滅菌離心管。
6.1.2 血漿：用一次性無(wú)菌注射器抽取靜脈血2mL，注入含EDTA2Na(乙二胺四乙酸二鈉)或檸檬酸鈉抗凝劑的玻璃管，立即輕輕顛倒玻璃管混合5-10次，使抗凝劑與靜脈血充分混勻，5-10min后即可分離出血漿，轉(zhuǎn)移至1.5mL滅菌離心管。
6.1.3 拭子、分泌物等樣品：在裝有拭子或分泌物的離心管中加入500μL PBS或生理鹽水，劇烈振蕩30s。棉拭子盡量擠出液體轉(zhuǎn)移到無(wú)RNA酶污染的離心管中，6000rpm離心20s，取上清備用。
6.1.4 病灶組織樣品：稱(chēng)取組織約0.1g于研磨器或組織勻漿器中研磨(zuì好置于冰上或加入液氮)，再加1mL生理鹽水研磨至無(wú)塊狀物，然后將樣品轉(zhuǎn)至1.5mL滅菌離心管中，8000rpm離心2min，取上清液于1.5mL滅菌離心管中。
6.2 RNA提取
可采購(gòu)北京百奧萊博科技有限公司生產(chǎn)的RNA提取試劑盒(過(guò)柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品，并按照相應(yīng)試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作。
 注：陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照為已經(jīng)抽提好的核酸(無(wú)需提取)，直接取4μL 加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽(yáng)性對(duì)照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽(yáng)性對(duì)照。

七、檢測(cè)步驟：
7.1 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光qRT-PCR 反應(yīng)液(RSVA/RSVB-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm 離心10s。
設(shè)所需要的PCR 反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 12μL N×12μL
酶混合物 4μL N×4μL
總量 16μL N×16μL
計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm 離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR 反應(yīng)管中分別加入16μL，向每管中加入處理后樣品/陰性對(duì)照(NTC)/陽(yáng)性對(duì)照(RSVA/RSVB-PTC)4μL，10000rpm 瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qRT-PCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入實(shí)時(shí)熒光PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
反轉(zhuǎn)錄(Reverse Transcription) 1循環(huán) 50℃ for 30 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 5 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 10 sec
55℃ for 45 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM和VIC(若儀器無(wú)VIC通道，可選擇HEX或JOE通道)。其中FAM基團(tuán)檢測(cè)RSVA，VIC/HEX/JOE基團(tuán)檢測(cè)RSVB。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。

八、結(jié)果分析：
8.1 結(jié)果分析條件設(shè)定
直接讀取檢測(cè)結(jié)果?；€(xiàn)和閾值設(shè)定原則根據(jù)儀器噪聲情況進(jìn)行調(diào)整，以閾值線(xiàn)剛好超過(guò)正常陰性樣品擴(kuò)增曲線(xiàn)的zuì高點(diǎn)為準(zhǔn)。
8.2 試驗(yàn)成立判定
(1) 陰性對(duì)照(NTC)：FAM和VIC/HEX/JOE通道均無(wú)擴(kuò)增。
(2) 陽(yáng)性對(duì)照(RSVA/RSVB-PTC)：FAM和VIC/HEX/JOE通道均有擴(kuò)增。
以上條件應(yīng)同時(shí)滿(mǎn)足，否則，此次試驗(yàn)視為無(wú)效
8.3 結(jié)果判定
(1) FAM通道：Ct值≤35 RSVA核酸為陽(yáng)性；Ct值顯示為無(wú)的樣本為陰性樣本，表明RSVA核酸陰性。
Ct值在35-40個(gè)循環(huán)之間，為灰區(qū)，需要進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)。如果重復(fù)擴(kuò)增曲線(xiàn)為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線(xiàn)，判為樣本陽(yáng)性，表明RSVA核酸陽(yáng)性；否則判為樣本陰性。
(2) VIC/HEX/JOE通道：Ct值≤35 RSVB核酸為陽(yáng)性；Ct值顯示為無(wú)的樣本為陰性樣本，表明RSVB核酸陰性。Ct值在35-40個(gè)循環(huán)之間，為灰區(qū)，需要進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)。如果重復(fù)擴(kuò)增曲線(xiàn)為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線(xiàn)，判為樣本陽(yáng)性，表明RSVB核酸陽(yáng)性；否則判為樣本陰性。

九、注意事項(xiàng)：
(1) 初次使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)。并嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)步驟操作。
(2) 所有使用的離心管zuì好高壓滅菌，而且必須不含RNA 酶。
(3) PCR操作應(yīng)嚴(yán)格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、PCR 擴(kuò)增區(qū)等)，防止實(shí)驗(yàn)室污染。
(4) 樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺(tái)進(jìn)行，以免污染。
(5) 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待，并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。


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