北京百奧萊博供應(yīng)的NMY51酵母感受態(tài)細胞用于科研目的，我公司的NMY51酵母感受態(tài)細胞品質(zhì)上佳，經(jīng)過多年的開發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括NMY51酵母感受態(tài)細胞在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：NMY51酵母感受態(tài)細胞
英文名稱：NMY51 Chemically Competent Cell
產(chǎn)品貨號：MQ0068
產(chǎn)品規(guī)格：10×100μl/50×100μl

DUALmembrane系統(tǒng)是專門篩選跨膜蛋白間相互作用的檢測技術(shù)，它利用分離的泛素系統(tǒng)(split-ubiquitin)直接檢測天然狀態(tài)下膜蛋白間的相互作用，是目前市面上檢測膜蛋白間相互作用的酵母雙雜系統(tǒng)。
此系統(tǒng)采用NMY51酵母菌株，可直接轉(zhuǎn)化質(zhì)粒進行蛋白互作驗證或篩庫試驗；此菌株Transformation marker為：trp1，leu2-3，報告基因為：HIS3，ADE2和lacZ，步通過營養(yǎng)缺陷型報告基因(HIS3，ADE2)進行選擇性生長篩選，進一步通過LacZ報告基因進行β-半乳糖分析顯色的定量或半定量篩選，三個的報告基因，受不同啟動子的調(diào)控，降低假陽性幾率。
原理：泛素(ubiquitin)分子量很小，由76aa 殘基組成；泛素作為降解信號分子，可以連接另外一種蛋白質(zhì)的N端，然后被泛素專一性蛋白酶(UBPs)識別，從而導(dǎo)致與泛素相連的蛋白被酶解。
泛素可以人為分成兩部分：N端(Nub)，C端(Cub)。先，人為地將泛素Nub的3位異亮氨酸突變?yōu)楦拾彼?NubI突變?yōu)镹ubG)。這樣與Cub的親合力大大降低，避免了Cub和Nub自我結(jié)合或接近的可能性。其次，將Cub部分與人工合成的LexA-VP16轉(zhuǎn)錄激活因子融合成一個融合蛋白Cub-LexA-VP16。
正常條件下NubG不與Cub結(jié)合，UBPs也不能識別分離的泛素，轉(zhuǎn)錄激活因子也不會被切下來。zuì后，將要檢測的蛋白質(zhì)分別與NubG和Cub融合，形成bait融合蛋(bait-cub-LexA-VP16)和prey融合蛋白(prey-NubG)。
如果bait和prey發(fā)生相互作用，就會促使NubG和Cub的相互接近，被 UBPs識別，導(dǎo)致LexA-VP16的解離，進入核內(nèi)，從而激活報告基因的轉(zhuǎn)錄。
此系統(tǒng)可使用四種Bait質(zhì)粒：pBT3-N，pBT3-SUC，pBT3-STE，pBT3-C，篩選標志均為LEU；三種Prey質(zhì)粒：pPR3-C，pPR3-SUC，pPR3-STE，篩選標志均為TRP。NMY51感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，-80℃可保存三個月，經(jīng)PGADT7質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>104cfu/μg DNA。
保存條件：-80℃
基因型：
MATahis3200trp1-901leu2-3,112ade2LYS2::(lexAop)4-HIS3ura3::(lexAop)8-lacZade2::(lexAop)8-ADE2 GAL4
操作說明：
1.取100 μl冰上融化的NMY51感受態(tài)細胞，依次加入預(yù)冷的目的質(zhì)粒2-5μg，Carrier DNA(95-100度5min 快速冰浴，重復(fù)一次)10 μl，PEG/liAC 500μl并吸打幾次混勻，30度水浴30分鐘(15 min時翻轉(zhuǎn)6-8次混勻)。
2.將管放42度水浴15min(7.5 min時翻轉(zhuǎn)6-8次混勻)。
3.5000 rpm離心40s棄上清，ddH2O 400μl重懸，離心30s棄上清。
4.ddH2O 50μl重懸，涂板,29℃培養(yǎng)48-80h。
注意事項：
1.感受態(tài)細胞zuì好在冰上融化。
2.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少zuì終用于涂板的菌量。
3.同時轉(zhuǎn)化2-3種質(zhì)粒時可增加質(zhì)粒的用量。
4.NMY51酵母菌株對高溫敏感，zuì適生長溫度為27-30℃；高于31℃，生長速度和轉(zhuǎn)化效率呈指數(shù)下降。
5.酵母在缺陷培養(yǎng)基中生長速度比YPDA培養(yǎng)基慢，培養(yǎng)基中缺陷成分越多，生長越慢，以轉(zhuǎn)化涂板為例：涂YPDA平板29℃，48h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆；涂SD單缺平板29℃，48-60h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆，涂SD雙缺平板29℃，60-80h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆。

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