Stable電擊感受態細胞由北京百奧萊博供貨并提供相關技術服務支持，本品用于科研目的，本品質量穩定，價位合理，需要Stable電擊感受態細胞等克隆與表達產品的客戶，請到我公司官網聯系我們。...

特別提示：包括Stable電擊感受態細胞在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：Stable電擊感受態細胞
英文名稱：stable Electroporation-Competent Cell
產品貨號：MQ0032
產品規格：5×50μl/20×50μl

Stable電擊感受態細胞只能用于電擊轉化，不可用于熱激轉化。Stable菌株是高轉化效率菌株，是逆轉錄病毒/慢病毒載體系統推薦使用的菌株，具有與Stbl2，Stbl3完全不同的基因型，但是表現出比Stbl2，Stbl3更優異的性能，特別適合慢病毒或具有末端重復序列DNA片段的克隆。
基因組含有重組酶recA1 rel A1突變，可有效抑制長片段末端重復區的重組，降低錯誤重組的概率；同時含有核酸酶endA1突變，避免了提取質粒過程中核酸酶的污染，大大提高了高純度病毒質粒的產量和質量。
lacZΔM15的存在使Stable可用于藍、白斑篩選，此菌株具有四環素和鏈霉素抗性。
Stable電擊感受態細胞適用于大質粒的構建或者各種具有末端重復序列的復雜DNA文庫構建，經特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率>2×1010 cfu/μg DNA。
保存條件：-80℃
基因型：
F"proA+B+ lacIq ?(lacZ)M15 zzf::Tn10(TetR)?(ara-leu)7697 araD139 fhuA ?lacX74 galK16 galE15 e14-Φ80dlacZ?M15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL(StrR)rph spoT1 ?(mrr-hsdRMS-mcrBC)
操作說明：
1.0.1cm電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘，待其瀝干水分，正置5分鐘，使乙醇充分揮發，待乙醇揮發干凈立即插入冰中，壓實冰面，電杯頂離冰面0.5 cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5分鐘充分降溫。
2.取-80℃保存的Stable電擊感受態細胞插入冰中5分鐘，待其融化，加入目的DNA(質粒或連接產物)并用手撥打EP管底輕輕混勻，避免產生氣泡，立即插入冰中。
A.測定轉化效率使用1 μl 10 pg/μl的對照質粒pUC19；
B.對于連接產物，請用乙醇沉淀DNA后加入適量TE緩沖液(10mM Tris HCl，pH7.5;1mM EDTA)重懸，DNA濃度不超過100ng/μl，體積不超過5μl/50μl感受態。
3.用200 μl槍頭將感受態-DNA混合物快速移到電擊杯中，避免產生氣泡，蓋上杯蓋。
4.啟動電轉儀，設置參數：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV(此為BioRad電轉儀推薦參數，也可按所用電轉儀推薦的參數操作)，將電擊杯快速放入電轉槽中，電擊完成快速插入冰中。
5.2分鐘后從冰中取出電擊杯，放室溫，加入700 μl不含抗生素的無菌S.O.C.培養基(室溫)，用1ml槍吹吸電擊杯底部數次混勻后，轉移到50ml離心管(BD Falcon50ml錐形離心管等)，向離心管中補加S.O.C.培養基至5ml。30℃，225 rpm復蘇90分鐘。當質粒中含有不穩定片段時，30℃培養可降低錯誤重組的概率，若轉化control pUC19計算轉化效率，則需37℃，225 rpm復蘇60分鐘。
6.5000rpm離心一分鐘收菌，重懸后取100-200 μl涂布到含相應抗生素的S.O.C平板上(因菌量較大，若全部涂板請選用直徑15cm培養皿2-5個)。將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養20-24小時。
注意事項：
1.對不穩定DNA片段的克隆或逆轉錄病毒/慢病毒載體的構建，涂板后平板應在30℃培養，以減少發生錯誤重組的概率。
2.制備高純度病毒質粒時，應使用新鮮轉化的平板接菌，新鮮菌液提取質粒，菌液不可低溫保存后提取質粒。
3.感受態細胞zuì好在冰中緩慢融化。插入冰中10分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。混入目的DNA時應輕柔操作。
4.加入DNA時體積不應大于感受態體積的1/10。
5.電擊感受態細胞加入電擊杯應避免產生氣泡，氣泡會增加弧光放電風險。
6.當DNA不純或存在鹽，乙醇，蛋白及緩沖液等污染時，轉化效率急劇下降。
7.電擊杯里的離子可增加溶液的電導，增大在含有細胞和DNA的溶液中產生電流和弧光放電的風險。
8.若轉化大質粒或想獲得較高轉化效率，推薦使用高純質粒提取試劑盒提取質粒。質粒增大一倍，轉化效率下降一個數量級。
9.對于連接產物轉化，zuì好轉化前乙醇沉淀DNA后用適量TE緩沖液(10 mM Tris HCl，pH7.5;1 mM EDTA)重懸產物，保證 DNA濃度不超過100 ng/μl。過高濃度連接產物或過大體積連接產物會降低轉化效率，增加弧光放電的風險。
10.混入質粒時應輕柔操作，吸取感受態細胞時避免用力過猛，以免剪切力過大損傷細胞膜，降低轉化效率。轉化高濃度的質粒或連接產物可相應減少zuì終用于涂板的菌量。
11.電擊感受態細胞zuì好保存在-80℃以下，高于-80℃超期儲存會導致轉化效率會下降。

根據您的關注的Stable電擊感受態細胞，Stable電擊感受態細胞，MQ0032，百奧萊博，，，您可能還對以下產品有需求：



名稱：DNA去磷酸化試劑盒
貨號：BTN130828
規格：20次
分子克隆時，載體的自連大降低了連接效率，而對載體DNA 兩個5′端的-PO4基團進行去磷酸化處理可以抑制自連反應。此外在進行DNA或RNA5′端標記前，也需要將其本來的-PO4基團去除再加上標記基團。本公司開發的DNA去磷酸化產品就是針對這一目的而開發。

產品特點：
1.基于細菌堿性磷酸酶，反應在較高溫度進行，效率更高。
2. 把DNA和RNA 5′端的-PO4基團變成-OH基團，喪失連接能力。
3. 模板可以是單鏈，也可以是雙鏈，既可以是DNA，也可以是RNA。
4.處理后的核酸純化后可以直接用于連接反應和標記反應。
5. 本產品足夠20次去磷酸化實驗。

試劑盒組成

成分	規格
10×去磷酸緩沖液	100μl
細菌堿性磷酸酶(0.5U/μL)	50μl
超純水	1ml
說明書	1份

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期為6個月。

使用方法：
注意：dNTP和ATP 也是堿性磷酸酶的底物，所以如果核酸溶液中有dNTP和ATP，一定要先將其去除。否則它們會耗掉大量的堿性磷酸酶，降低DNA 去磷酸化效率。

1、在微量離心管中配制下列反應液(50μL)：

成分	用量
DNA片段	不超過10pmol
10×去磷酸緩沖液	5μl
細菌堿性磷酸酶	2.5μl
超純水到	50μl

2、65℃反應30分鐘。如果是RNA樣品，建議在37℃反應30分鐘。
3、酚氯fǎng抽提去除酶活性，乙醇沉淀DNA 待用(見附)。

附：酚/氯fǎng抽提DNA、乙醇沉淀濃縮DNA(本試劑盒不提供相關試劑，需要從本公司另購相關試劑，下列操作僅供參考)：
1、在50μl DNA溶液中加入50μl超純水增加體積，以免純化過程中DNA 丟失。如果有必須，可以加入和4μL 核酸助沉劑提高回收效率。
2、加入100μL 酚/氯fǎng/異戊醇25：24：1 混合液震蕩半分鐘混勻，室溫12000g離心3分鐘，轉移上清到新離心管中。
3、重復上步操作一次。
4、加0.1倍體積(即10μL)的3 M 乙酸鈉溶液(pH5.2)。
5、再加入2.5倍體積(即250μL)的無水乙醇。
6、混勻后12000g 4℃離心10分鐘，小心棄上清。
7、加入1mL 70%乙醇，短暫離心3分鐘后小心棄上清。
8、短暫離心5秒，吸棄殘留液體(約30-50μL)。
9、室溫放置2分鐘干燥后加入適量的超純水溶解DNA，立即使用或放-20℃長期保存。

關注Stable電擊感受態細胞，Stable電擊感受態細胞，MQ0032，百奧萊博，，的同時，為您推薦更多您可能感興趣的產品：

貨號	名稱	規格
BTN90407B	pression/BTN90407B.html" target="_blank">λDNA(不含N6-甲基腺嘌呤)	5μg
BTN140429	pression/BTN140429.html" target="_blank">大腸桿菌M15化學感受態細胞	0.1mL*10
BTN70602	pression/BTN70602.html" target="_blank">DNA快速連接試劑盒	100次
BTN90801B	pression/BTN90801B.html" target="_blank">一站式TA克隆試劑盒(含感受態細胞)	20次
YT453	pression/YT453.html" target="_blank">p53熒光素酶報告基因質粒(p53抑癌基因質粒)	1μg
YT465	pression/YT465.html" target="_blank">C端DsRed標簽融合蛋白質粒(紅色熒光蛋白)	1μg

如果您覺得“MQ0032 Stable電擊感受態細胞”描述資料不夠齊全，請聯系我們獲取詳細資料。(聯系時請告訴我從給覽網看到的，我們將給您最大優惠！)
本頁鏈接：http://m.lgsztm.com/com_bjbiolab01/sell/itemid-8512406.html
已經有1017位訪客查看了本頁.