本試劑盒適用于常見的各種綠藻、金藻、硅藻、甲藻、螺旋藻等單細(xì)胞、多細(xì)胞、絲狀體、多核體等形態(tài)真核類藻類。配合適當(dāng)方法調(diào)整，也可以用于藍(lán)藻等原核藻類的細(xì)胞器提取。...

微藻細(xì)胞核提取試劑盒

 

產(chǎn)品編號(hào)：HR8193

產(chǎn)品組成：

微藻細(xì)胞核提取試劑盒儲(chǔ)存條件：

提取液A、C、D 2-8℃保存；提取液B -20℃保存。有效期1年。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

微藻細(xì)胞核提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種真核類微藻中提取細(xì)胞核。此試劑盒提供了一個(gè)系統(tǒng)，維持核組分是分開和完整的。優(yōu)化的試劑配方和程序可以快速分離胞核，而絕少交叉污染。

本試劑盒適用于常見的各種綠藻、金藻、硅藻、甲藻、螺旋藻等單細(xì)胞、多細(xì)胞、絲狀體、多核體等形態(tài)真核類藻類。配合適當(dāng)方法調(diào)整，也可以用于藍(lán)藻等原核藻類的細(xì)胞器提取。

本試劑盒提取的胞核組分仍保持其生化功能，適合各種下游分析如核蛋白提取、轉(zhuǎn)錄活性，RNA拼接，gel－shift分析，報(bào)告分析，酶活性分析和WB等。

試劑盒以外自備試劑耗材和儀器：

● 移液器 ● 離心機(jī) ● 振蕩器 ● 渦旋混勻器 ● PBS ● β-巰基乙醇（備選）

注意事項(xiàng)：

● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。

● 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。

● 離心機(jī)轉(zhuǎn)速有相對(duì)離心力（RCF，×g）和每分鐘轉(zhuǎn)速（RPM）兩種表示方式，有些離心機(jī)設(shè)置有RPM 和×g 顯示切換，但部分離心機(jī)沒(méi)有自動(dòng)切換功能。需要用下面的公式進(jìn)行換算：

g=r×1.118×10^-5×rpm²（r為有效離心半徑，即從離心機(jī)軸心到離心收集管底部中心位置的長(zhǎng)度，單位為厘米) 例如: 轉(zhuǎn)速為3000rpm，有效離心半徑為10 cm，則相對(duì)離心力（RCF，×g）為=10×1.118×10^-5×3000²=1006.2（×g）。

微藻細(xì)胞核提取試劑盒使用方法：

1、提取液制備：

每500μL冷的提取液A中加入10μL提取液B，混勻后置冰上備用。

【注】：

● 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備提取液，提取液B不可以一次全部加入提取液A。

● 以下步驟使用到的提取液A為此步驟配制好的提取液A。

2、取培養(yǎng)好的微藻樣品，1000×g條件下離心5-10分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞。

3、用PBS洗滌微藻細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

4、每300μL體積或300mg濕重微藻細(xì)胞沉淀物中加入500μL酵母提取液D，混勻后，在30℃條件下保溫15分鐘。

【注】：

● 微藻數(shù)量根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況調(diào)整，每次的提取液用量并不是一定的，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整。

● 在處理有些微藻樣本時(shí)，在試劑D中加入終濃度0.2%的β-巰基乙醇有利于提高微藻細(xì)胞的得率。（選作，可不加）

5、在1000×g條件下離心5-10分鐘，移除上清，收集微藻沉淀。

6、用PBS洗滌微藻細(xì)胞沉淀一次，1000×g離心5分鐘，收集細(xì)胞，洗滌后盡可能吸干上清。

7、用提取液A重懸微藻細(xì)胞。每300μL細(xì)胞（沉淀體積）中加入1ml提取液A。

8、將微藻細(xì)胞懸液置振蕩器上37℃-55℃振蕩24-72小時(shí)。

【注】：

● 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動(dòng)即可。

● 沒(méi)有振蕩條件也可以不振蕩，中間每隔幾小時(shí)用移液器吹打混勻即可。

● 根據(jù)下游細(xì)胞核的應(yīng)用選擇合適的溫度，最佳溫度為55℃，對(duì)細(xì)胞核各種蛋白活性要求較高的實(shí)驗(yàn)可以用較低溫度，使用37℃至室溫，適當(dāng)延長(zhǎng)處理時(shí)間。

● 不同類型的微藻需要處理的時(shí)間差異較大。

● 部分細(xì)胞壁較厚的細(xì)胞類型可能需要處理更長(zhǎng)時(shí)間。可以延長(zhǎng)至72小時(shí)以上處理以提高細(xì)胞核得率。

9、離心力1000×g離心5分鐘，將上清移入另一離心管保存?zhèn)溆茫占?xì)胞沉淀。

10、用PBS洗滌微藻細(xì)胞沉淀一次，1000×g離心5分鐘，收集細(xì)胞，洗滌后盡可能吸干上清。

11、在微藻細(xì)胞沉淀中加入1ml試劑C重懸細(xì)胞，混勻。

12、將細(xì)胞懸液置振蕩器上振蕩20-30分鐘。

【注】：

● 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動(dòng)即可。

● 沒(méi)有振蕩條件也可以不振蕩，室溫靜置，中間每隔幾分鐘用移液器輕輕吹打混勻即可。

13、離心力2000×g離心5分鐘，棄上清，收集沉淀。

14、用PBS洗滌沉淀1-2次。

15、沉淀即為微藻細(xì)胞核。將上述微藻細(xì)胞核沉淀用適當(dāng)緩沖液重懸后2-8℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

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