高通量96孔板DNA產(chǎn)物純化回收由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品用于科研目的，我公司的高通量96孔板DNA產(chǎn)物純化回收品質(zhì)上佳，經(jīng)過(guò)多年的開(kāi)發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購(gòu)。...

特別提示：包括高通量96孔板DNA產(chǎn)物純化回收試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：高通量96孔板DNA產(chǎn)物純化回收試劑盒
英文名稱：96wells DNA Product Purification and Recovery Kit
產(chǎn)品貨號(hào)：WH0157
產(chǎn)品規(guī)格：4×96孔|24×96孔板

本試劑盒通過(guò)96孔吸附板特異性地結(jié)合酶切、PCR、測(cè)序等反應(yīng)溶液中的DNA片段，可除去蛋白質(zhì)、有機(jī)化合物、無(wú)機(jī)鹽離子及寡核苷酸引物等雜質(zhì)。純化的DNA可適用于限制性酶切、測(cè)序、文庫(kù)篩選，連接和轉(zhuǎn)化等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
·回收100bp-10kb DNA片段，回收率可達(dá)80%以上。
·每孔zuì多可吸附的DNA量為5μg。
·純度高：可直接用于下游實(shí)驗(yàn)。

提取流程：


提取實(shí)例：

使用本試劑盒純化900bp，3500bp，4500bp片段。50μl洗脫，3μl上樣，瓊脂糖凝膠濃度為1%，6V/cm電泳20min，1、2、3為本試劑盒純化，4是使用某進(jìn)口品牌試劑盒純化。

組分	4板	24板
平衡液BL	240ml	3×500ml
結(jié)合液PB	240ml	3×500ml
漂洗液PW	3×50ml	2×500ml
洗脫緩沖液TB	60ml	240ml
半裙邊96孔吸附板CB2	4板	24板
96孔深孔板	8板	48板
250ml試劑瓶	-	1個(gè)
封口膜	4張	24張

儲(chǔ)存條件：室溫（15-25℃)干燥條件下，可保存12個(gè)月，更長(zhǎng)時(shí)間的保存可置于2-8℃。2-8℃保存條件下，若溶液產(chǎn)生沉淀，使用前應(yīng)將試劑盒內(nèi)的溶液在室溫放置一段時(shí)間，必要時(shí)可在37℃水浴中預(yù)熱10min，以溶解沉淀。

注意事項(xiàng)：請(qǐng)務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項(xiàng)。
1．本試劑盒適用于無(wú)選擇性的回收溶液中所有DNA片段（可去除30 bp以下的小片段），如需選擇性回收特定片段，同時(shí)去除其他不同大小片段，請(qǐng)選擇膠回收試劑盒。
2．回收得率與DNA初始量及洗脫體積有關(guān)。DNA初始量越低，洗脫體積越少，回收得率越低。洗脫體積zuì好不要少于每孔60μl。
3．每次使用前取50ml漂洗液PW并加入200 ml無(wú)水乙醇搖勻后使用。
4．使用前請(qǐng)先檢查平衡液BL是否出現(xiàn)渾濁，如有混濁現(xiàn)象，可在37℃水浴中加熱幾分鐘，即可恢復(fù)澄清。實(shí)驗(yàn)前使用平衡液處理吸附柱，可以zuì大限度激活硅基質(zhì)膜，提高得率。
5．實(shí)驗(yàn)前使用平衡液BL處理吸附板，可以zuì大限度激活硅基質(zhì)膜，提高得率。
6．用平衡液BL處理過(guò)的板子zuì好當(dāng)天使用，放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)影響效果。

操作步驟：（離心法)
1．板平衡步驟：將96孔吸附板CB2疊放在96孔深孔板上，每孔中加入500 μl的平衡液BL，3,600rpm（～2,130×g)離心3 min，棄廢液，將吸附板重新放回深孔板上。（請(qǐng)使用當(dāng)天處理過(guò)的吸附板）
2．估計(jì)PCR反應(yīng)液或酶切反應(yīng)液的體積，向其中加入3倍體積的結(jié)合液PB。
  舉例：如PCR反應(yīng)體系為100 μl （不包括石蠟油體積)，則加入300 μl結(jié)合液PB。如果混合液體積超過(guò)PCR管的體積，可將PCR反應(yīng)液或者酶切反應(yīng)液轉(zhuǎn)移到96孔深孔板中，與結(jié)合液PB進(jìn)行混合再進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)。
3．充分混勻后轉(zhuǎn)移所有上述混合液到步平衡過(guò)的96孔吸附板CB2中。室溫放置2 min，3,600rpm（～2,130×g)離心5 min，棄廢液，將吸附板重新放回同一深孔板中。
  注意：?jiǎn)慰孜街萘繛?00 μl，若樣品體積大于700 μl可分批加入離心。
4．向96孔吸附板CB2每孔中加入700 μl漂洗液PW （使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇)，3,600rpm（～2,130×g)離心3 min，棄廢液，將吸附板重新放回同一深孔板中。
5．重復(fù)操作步驟4。
6．3,600rpm（～2,130×g)離心10min，目的是將吸附板中殘余的漂洗液去除。
  注意：漂洗液中乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶反應(yīng)（酶切、PCR等）實(shí)驗(yàn)。
7．將96孔吸附板CB2置于一個(gè)新的96孔深孔板中，向吸附板各孔膜的中間部位懸空滴加80-100 μl ddH2O（pH≥7.5）或洗脫緩沖液TB，室溫放置5 min，3,600rpm （～2,130×g)離心10min收集DNA溶液。
  注意：通常80 μl的洗脫液平均洗脫得到50 μl的DNA產(chǎn)物。為提高得率，可以增加洗脫液體積。此外，若用ddH2O洗脫應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5范圍內(nèi)。

操作步驟：（負(fù)壓法)
1．正確連接負(fù)壓裝置，將96孔吸附板CB2置于負(fù)壓裝置上；向96孔吸附板CB2每孔中添加200 μl平衡液BL，開(kāi)啟并調(diào)節(jié)負(fù)壓，吸盡板中溶液。
2．在PCR、酶切、酶標(biāo)或測(cè)序反應(yīng)液中，加3倍體積的PB；混合均勻后轉(zhuǎn)移到平衡過(guò)的96孔吸附板CB2中，室溫放置2 min，開(kāi)啟并調(diào)節(jié)負(fù)壓吸盡板中溶液。
3．向96孔吸附板CB2中每孔添加200 μl漂洗液PW，吸盡板中溶液。
4．重復(fù)第3步驟。
5．以zuì大負(fù)壓將96孔吸附板CB2抽吸10min。
  注意：漂洗液中乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶反應(yīng)（酶切、PCR等）實(shí)驗(yàn)。
6．導(dǎo)流管朝下將96孔吸附板CB2于吸水紙上用力拍擊6次。
7．將96孔吸附板CB2置于96孔深孔板上，在膜正中央加80-100 μl ddH2O（pH≥7.5）或洗脫緩沖液TB，室溫靜置5 min。3,600rpm離心10min收集DNA溶液。
8．在該96孔深孔板上覆蓋一張新的封口膜，DNA溶液保存于-20℃?zhèn)溆谩?br />
DNA濃度及純度檢測(cè)：
1．DNA可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。
2．DNA應(yīng)在OD₂₆₀處有顯著吸收峰，OD₂₆₀值為1相當(dāng)于大約50μg/ml雙鏈DNA、40 μg/ml單鏈DNA。
3．OD₂₆₀/OD₂₈₀比值應(yīng)為1.7-1.9，如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液，而使用ddH2O，比值會(huì)偏低，但并不表示純度低，因?yàn)閜H值和離子存在會(huì)影響光吸收值。

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名稱：紅細(xì)胞裂解液A型(核酸純化)
貨號(hào)：BTN60403
規(guī)格：250mL
本品用于快速裂解哺乳動(dòng)物全血中的紅細(xì)胞而基本不破壞白細(xì)胞和其他淋巴細(xì)胞的完整性。由于紅細(xì)胞是血液的主要細(xì)胞成份，不含DNA和RNA，其所含血紅素能抑制PCR反應(yīng)，所以先用本產(chǎn)品裂解紅細(xì)胞，再提取基因組DNA或RNA 有助于提高所得樣品純度。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1.快速，一次處理只需要2-3分鐘。處理后提取血液DNA可以不需要酚/lǜ仿去蛋白質(zhì)。
2.，一次處理能裂解80%以上的哺乳動(dòng)物紅細(xì)胞，一般樣品zuì多只需要處理兩次。
3.擴(kuò)容性好，可以一次處理多達(dá)幾十毫升的樣品，也可以處理100μL的血液。
4. 兼容性好，可以與市場(chǎng)上大多數(shù)血液DNA提取試劑盒結(jié)合使用。

儲(chǔ)存條件：常溫運(yùn)輸，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在裝有抗凝血液的離心管中，按1:1的比例加入紅細(xì)胞裂解液A型并輕柔顛倒混勻。
2. 5000-10000 g室溫離心2分鐘，小心吸棄棄上清。
3. 將細(xì)胞沉淀重懸于1/2 體積的紅細(xì)胞裂解液A型中，輕柔吹打混勻后5000-10000g室溫離心2分鐘。
4.沉淀即為去除了紅細(xì)胞的血液細(xì)胞，可以直接用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

名稱：血液細(xì)胞核DNA和線粒體DNA共提試劑盒
貨號(hào)：BTN120810
規(guī)格：25次
本試劑盒是在本公司血液DNA提取試劑盒產(chǎn)品基礎(chǔ)上開(kāi)發(fā)的、專門用于從新鮮或冷凍的哺乳動(dòng)物抗凝全血中同時(shí)提取細(xì)胞核DNA和線粒體DNA的試劑。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1.一份樣品可以同時(shí)得到細(xì)胞核DNA和線粒體DNA，節(jié)約寶貴的實(shí)驗(yàn)材料。
2. DNA產(chǎn)率高。細(xì)胞核DNA產(chǎn)率一般為30-50μg/mL 新鮮血液，線粒體DNA產(chǎn)率約為1μg/mL 新鮮血液。陳舊血液DNA產(chǎn)率差別較大。
3. DNA 純凈，OD260/OD280在1.8-2.0 之間，可直接用于PCR、酶切、雜交等實(shí)驗(yàn)。
4.適用于哺乳動(dòng)物血液，不適用于其他動(dòng)物血液。
5. 所用試劑安全，健康環(huán)保。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
紅細(xì)胞裂解液D型	250mL
溶液A	25ml
溶液B	2ml
溶液C	5ml
DNA 洗脫液2.0	10ml
說(shuō)明書(shū)	1份

儲(chǔ)存條件：常溫運(yùn)輸和保存，保存期限一年。

使用方法：

一：白細(xì)胞核和線粒體的分離
1. 將3mL 用EDTA 抗凝管收集的新鮮血液轉(zhuǎn)移到一個(gè)干凈的15mL塑料離心管中。注意：zuì好使用新鮮血液。對(duì)于陳舊血液，由于凍凝過(guò)程中冰晶已經(jīng)對(duì)細(xì)胞核膜和線粒體膜產(chǎn)生損傷，所以DNA 得率會(huì)大大減少，具體減少多少根據(jù)凍凝時(shí)間長(zhǎng)短不同而不同。
2. 向血液中加入等體積(3mL)的D型紅細(xì)胞裂解液；輕柔顛倒數(shù)次混勻，室溫靜置10分鐘以裂解紅細(xì)胞和白細(xì)胞的細(xì)胞膜，直至溶液變成清澈的紅色。注意：D型紅細(xì)胞裂解液一旦打開(kāi)后，非常容易污染細(xì)菌，未用完的部分zuì好-20℃保存，下次使用前，要溶解后充分搖勻。
3.室溫下1000 g離心10分鐘沉淀白細(xì)胞核。
4.轉(zhuǎn)移上清(含線粒體)到新的15mL塑料離心管中，注意不要觸及白細(xì)胞核沉淀。
5.在白細(xì)胞核沉淀中加入3mL D型紅細(xì)胞裂解液。輕柔顛倒數(shù)次混勻后，室溫下1000 g離心10分鐘以沉淀白細(xì)胞核。
6.轉(zhuǎn)移上清(含線粒體)到第4 步所得的、已經(jīng)含有上清的15mL塑料離心管中。
將白細(xì)胞核沉淀放置冰上，和即將準(zhǔn)備好的線粒體一起用于DNA提取，也可以放置在-20℃待用。
7. 將匯集的含線粒體的上清于4℃下15000g離心30分鐘。
8.小心移棄上清，小心將線粒體沉淀重懸在1mL D型紅細(xì)胞裂解液中，然后轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管中，15000g離心5分鐘，移棄上清得到線粒體沉淀。
9. 用1mL D型紅細(xì)胞裂解液洗滌線粒體2次(每次先重懸線粒體，再15000g離心5分鐘得沉淀)。
10. 所得線粒體可以直接用于DNA提取，也可放置在-20℃待用。

二：DNA的提取(下面步驟為白細(xì)胞核DNA提取和線粒體DNA提取通用)
11.在白細(xì)胞沉淀或線粒體沉淀中加入0.5mL溶液A，用移液槍吹打數(shù)次混勻后再加入75μL溶液B，混勻后于55℃溫育10分鐘。注意：溶液將成渾濁狀。
12. 再加入0.2mL溶液C充分顛倒混勻。
13.在4℃下13000g離心20分鐘后，將上清(含DNA)轉(zhuǎn)入一新的1.5mL塑料離心管中。
14. 加入兩倍體積的自備無(wú)水乙醇充分震蕩混勻后，室溫13000 g離心5分鐘，去盡上清。
15. 加入1mL 75%乙醇，充分混勻后室溫13000g離心5分鐘，去盡上清。
16. 重復(fù)上步一次。
17. 短暫離心，去盡殘留溶液(此步十分重要，不要省略)。
18. 短暫晾干半分鐘，加入適量DNA 洗脫液2.0 溶解DNA(對(duì)細(xì)胞核DNA，可加入500μL DNA 洗脫液2.0，對(duì)線粒體DNA，可加入50μL DNA 洗脫液2.0)。
19. 65℃保溫15分鐘以便徹底溶解DNA沉淀。溶解后的DNA可以立即用于后續(xù)的OD 檢測(cè)、酶切、PCR或其他實(shí)驗(yàn)，也可以放置在-20℃長(zhǎng)期保存。

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