EHA101農桿菌感受態細胞由北京百奧萊博供貨并提供相關技術服務支持，本品用于科研目的，本產品質量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多EHA101農桿菌感受態細胞等克隆與表達產品請聯系我司咨詢訂購。...

特別提示：包括EHA101農桿菌感受態細胞在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：EHA101農桿菌感受態細胞
英文名稱：EHA101 Chemically Competent Cell
產品貨號：MQ0057
產品規格：10×100μl/50×100μl

EHA101菌株為C58型背景，核基因中含有篩選標簽——利福平抗性基因rif，為了便于轉化操作，此菌株攜帶一無自身轉運功能的胭脂堿型Ti質粒pEHA101(pTiBo542DT-DNA)，此質粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件，pEHA101(pTiBo542DT-DNA)質粒自身的T-DNA轉移功能被破壞，但可以幫助轉入的雙元載體T-DNA順利轉移)。
pEHA101(pTiBo542DT-DNA)型Ti質粒含有篩選標簽：strep、kan，賦予EHA101菌株鏈霉素抗性和卡那霉素抗性，適用于玉米、水稻、煙草等植物的轉基因操作，經pK7WGF2質粒檢測轉化效率可達104 cfu/μg DNA。
保存條件：-80℃
基因型：
C58(rif R)Ti pEHA101(pTiBo542 D T-DNA)(kanR，strepR)Nopaline
操作說明：
1.取-80℃保存的農桿菌感受態于冰上待其部分融化，處于冰水混合狀態時插入冰中。
2.每100 μl 感受態加1 μg(體積不大于10 μl)質粒DNA，用手撥打管底混勻，依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、28℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。
3.加入700 μl無抗生素的LB或YEB液體培養基，于28℃，200rpm 振蕩培養2~3小時。
4.6000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培養箱培養2-3天。
注意事項：
1.加入質粒時體積不應大于感受態體積的1/10；質粒不純或存在乙醇等有機物污染，轉化效率急劇下降；質粒增大一倍，轉化效率下降一個數量級。
2.混入質粒時應輕柔操作，轉化高濃度的質粒可相應減少zuì終用于涂板的菌量。
3.利福平濃度不應高于25 μg/ml，過高的利福平濃度不利于農桿菌生長，會降低其生長速度和轉化效率。本公司感受態計算轉化效率時所用平板只含有50 μg/ml kan，若所用平板同時含有20 μg/ml rif則轉化效率降低到1/2。
4.培養基中加入利福平的目的是防止雜菌生長、篩選農桿菌；根據所用菌株抗性加入鏈霉素或慶大霉素可防止Ti質粒丟失，但鏈霉素不利于農桿菌的轉基因操作，所以一般培養農桿菌時不考慮鏈霉素或慶大霉素，Ti質粒丟失的概率低(可以忽略)。

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名稱：大腸桿菌XL2-Blue感受態細胞
貨號：BTN140376
規格：10*100μl
 本產品為采用大腸桿菌XL2-Blue菌株經特殊工藝處理得到的大腸桿菌化學感受態細胞，可用于DNA的化學轉化。使用pUC19質粒檢測，轉化效率可109，-80℃ 保存幾個月轉化效率不發生改變。

基因型：Tet RΔ(mcr A)183 Hte[F′ {pro AB lac Iq lac ZΔM15 Tn10(TetR)Amy CamR}]Δ(mcr CB-hsd SMR-mrr)173 end A1 sup E44thi- 1 rec A1 gyr A96 rel A1

儲存條件：干冰運輸，-80℃保存，有效期6個月。

名稱：N端EGFP標簽融合蛋白質粒(綠色熒光蛋白)
貨號：YT476
規格：1μg
本質粒是哺乳動物細胞表達質粒，用于表達N端含EGFP(Enhanced Green Fluorescent Protein, 增強綠色熒光蛋白)標簽的融合蛋白。該質粒含有CMV啟動子，可以啟動目的蛋白在細胞中的表達。在多克隆位點的前面有一個EGFP的完整編碼序列，因此在多克隆位點根據閱讀框插入目的基因就可以表達N端含有EGFP標簽的融合蛋白。利用EGFP的熒光特性可以比較容易地觀察融合蛋白的表達水平和細胞內定位，也可以利用EGFP抗體來檢測或免疫沉淀融合蛋白。該質粒為卡那霉素抗性。轉染細胞后，可以使用G418篩選穩定表達目的蛋白的細胞株。

本質粒質粒的主要信息如下：

Feature Nucleotide	Position
CMV promoter	1-602
T3 promoter and T3 primer binding site	620-639
EGFP	677-1393
Multiple cloning site	1394-1483
T7 promoter and T7 primer binding site	1503-1524
SV40 polyA signal	1536-1919
f1 origin of ss-DNA replication	2057-2363
bla promoter	2388-2512
SV40 promoter	2532-2870
Neomycin/kanamycin resistance ORF	205-3696
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal	3697-4155
pUC origin	4284-4951

本質粒(5003bp)的圖譜如下：


使用說明：
1. 次使用時請先取少量本質粒轉化大腸桿菌，進行質粒小量、中量或大量抽提后再用于后續用途。抽提獲得的質粒可以通過酶切電泳進行鑒定，或通過測序進行鑒定。
2. 本質粒在其多克隆位點適當酶切后可以插入待表達的目的基因，構建的質粒可以用常規方法轉染細胞。

儲存條件：-20℃。

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