頭孢吡肟鹽酸鹽試劑是高品質(zhì)的抗生素類產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應(yīng)，本產(chǎn)品用于生化實(shí)驗(yàn)研究等領(lǐng)域，頭孢吡肟鹽酸鹽試劑是我司眾多優(yōu)質(zhì)抗生素類之一，質(zhì)量堪比同類進(jìn)口產(chǎn)品，價(jià)格非常優(yōu)惠，目前正熱烈促銷中，恭候您的咨詢訂購。...

特別提示：包括頭孢吡肟鹽酸鹽在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：頭孢吡肟鹽酸鹽
英文名稱：Cefepime hydrochloride
產(chǎn)品貨號：QN1805
產(chǎn)品規(guī)格：500mg

CAS：123171-59-5
分子式：C₁₉H₂₄N₆O₅S₂·2HCl·H₂O
分子量：571.5
熔點(diǎn)：150℃(dec.)
儲存條件：2～8℃

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貨號	名稱	規(guī)格
QN0006	利奈唑酮	1g|5g
QN0013	恩諾沙星	5g|25g
QN0038	鹽酸克林霉素	5g
Y13508	慶大霉素硫酸鹽	5g|25g|100g
Y13521	阿莫西林三水物	5g|25g|100g
Y13543	鹽酸強(qiáng)力霉素	5g|25g|100g|500g
Y13557	硝酸益康唑	25g

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名稱：泰妙菌素
貨號：QN0007
規(guī)格：5g|25g
CAS：55297-95-5
分子式：C28H47NO4S
分子量：493.74
別名：硫姆林;替爾謀寧

名稱：G418遺傳霉素硫酸鹽
貨號：QN0062
規(guī)格：100mg
本品是真核表達(dá)篩選用抗生素，可以用于篩選表達(dá)特定抗性基因的穩(wěn)定細(xì)胞株。篩選哺乳動物細(xì)胞，推薦起始篩選濃度為400微克/毫升;篩選植物細(xì)胞，推薦起始篩選濃度為10微克/毫升;篩選酵母，推薦起始濃度為500微克/毫升。根據(jù)起始濃度的效果可以再適當(dāng)升高或降低G-418的使用濃度。

CAS：108321-42-2
分子式：C20H40N4O10·2H2SO4
分子量：692.71
儲存條件：2～8℃
性狀：白色粉末。
溶解性：可溶于水、甲醇、緩沖液和培養(yǎng)基。溶解后，0.22μm過濾除菌，分成小包裝，4℃可保存12個(gè)月，-20℃保存時(shí)間更長。zuì常用的儲存液使用100mMHEPES(pH7.3)配制，濃度為50mg/ml。使用HEPES配制的好處是加入儲存液不會改變培養(yǎng)體系的pH值。

名稱：嘌呤霉素
貨號：QN0078
規(guī)格：25mg|100mg
本品是蛋白質(zhì)合成抑制劑。抑制細(xì)菌、藻類原生物和哺乳動物細(xì)胞生長。

CAS：58-58-2
分子式：C22H29N7O5·2HCl
分子量：544.43
儲存條件：-20℃
純度：≥98%(TLC)
性狀：白色或白中帶有黃色的粉末
別名：二鹽酸嘌呤霉素;嘌呤霉素鹽酸鹽
溶解性：溶于水，參考濃度50mg/ml。

嘌呤霉素(Puromycin)是由白黑鏈霉菌(Streptomyces alboniger)發(fā)酵代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素，通過抑制蛋白質(zhì)合成而殺死革蘭氏陽性菌，各種動物和昆蟲細(xì)胞。某種特殊情況下有效作用大腸桿菌。作用機(jī)制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的類似物，能夠與核糖體的A位點(diǎn)結(jié)合并摻入到延伸的肽鏈中。嘌呤霉素同A位點(diǎn)結(jié)合后，不會參與隨后的任何反應(yīng)，從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)合成的提前終止并釋放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。

嘌呤霉素產(chǎn)生菌Streptomyces alboniger內(nèi)發(fā)現(xiàn)的pac基因編碼嘌呤霉素N-乙酰轉(zhuǎn)移酶(PAC)，賦予機(jī)體對嘌呤霉素產(chǎn)生抗性。這一特性如今普遍應(yīng)用于篩選特定攜帶pac基因質(zhì)粒的哺乳動物穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。

嘌呤霉素在細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選中的普遍應(yīng)用與慢病毒載體的特性有關(guān)，現(xiàn)在商業(yè)化的慢病毒載體多數(shù)都攜帶pac基因。在某些特定情況下，嘌呤霉素亦可以用來篩選轉(zhuǎn)化攜帶pac基因質(zhì)粒的大腸桿菌菌株。

使用方法：

1.建議使用濃度
哺乳動物細(xì)胞：1-10 μg/mL，zuì佳濃度需要?dú)缜€來確定;
大腸桿菌：LB瓊脂培養(yǎng)基篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)化pac基因的大腸桿菌，使用濃度為125μg/mL。注：使用嘌呤霉素篩選大腸桿菌穩(wěn)轉(zhuǎn)株需要的pH值調(diào)節(jié)，而且受宿主細(xì)胞本身的影響。

2.溶解方法
用蒸餾水溶解嘌呤霉素配制成50 mg/ml的母液，經(jīng)0.22 μm濾膜過濾除菌后分裝于-20℃凍存;也可溶于甲醇，配制成10 mg/ml的儲存液。

3. 嘌呤霉素殺滅曲線的確定(以shRNA轉(zhuǎn)染或者慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)為例)
嘌呤霉素有效篩選濃度跟細(xì)胞類型、生長狀態(tài)、細(xì)胞密度、細(xì)胞代謝情況及細(xì)胞所處細(xì)胞周期位置等有關(guān)。為了篩選到穩(wěn)定表達(dá)的shRNA細(xì)胞株，確定殺死未轉(zhuǎn)染/轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞的zuì低濃度嘌呤霉素至關(guān)重要。建議初次做實(shí)驗(yàn)的客戶一定要建立適合自身實(shí)驗(yàn)體系的殺死曲線(kill curve)。
1)Day 1：24孔板內(nèi)以5~8 x 104 cells/孔的密度鋪板，鋪?zhàn)銐蛄康目滓赃M(jìn)行后續(xù)的梯度實(shí)驗(yàn)。37℃細(xì)胞孵育過夜;
2)Day 2：
a)準(zhǔn)備篩選培養(yǎng)基：含不同濃度嘌呤霉素的新鮮培養(yǎng)基(如0-15μg/mL，至少5個(gè)梯度);
b)往孵育過夜后的細(xì)胞內(nèi)更換新鮮配制的篩選培養(yǎng)基;之后37℃孵育細(xì)胞;
3)Day 4：更換新鮮的篩選培養(yǎng)基，并觀察細(xì)胞存活率。
4)根據(jù)細(xì)胞的生長狀態(tài)，約2-3天更換新鮮的篩選培養(yǎng)基;
5)每日監(jiān)測細(xì)胞，觀察存活細(xì)胞率，從而確定抗生素篩選開始4-6天內(nèi)有效殺死非轉(zhuǎn)染或者所有非轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞的藥物zuì低濃度。

4. 哺乳動物穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的篩選
等轉(zhuǎn)染含有pac基因的質(zhì)粒后，細(xì)胞在含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基中增殖，以篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染子。
1)細(xì)胞轉(zhuǎn)染48h后，將細(xì)胞(原樣或稀釋)置于含有適當(dāng)濃度嘌呤霉素的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
注意：當(dāng)細(xì)胞處于分裂活躍期時(shí)，抗生素作用zuì明顯。細(xì)胞過于密集，抗生素產(chǎn)生的效力會明顯下降。zuì好進(jìn)行細(xì)胞分盤使其密度不超過25%。
2)每隔2-3天，移除和更換含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基。
3)篩選7天后評估細(xì)胞形成的病灶。病灶可能需要額外的一周或者更多時(shí)間，這依賴于宿主細(xì)胞系和轉(zhuǎn)染篩選效率。注意：每日進(jìn)行細(xì)胞生長狀態(tài)的觀察。嘌呤霉素的篩選至少需要48h，有效濃度嘌呤霉素的篩選周期一般在3-10天。
4)轉(zhuǎn)移和放置5-10個(gè)抗性克隆到一個(gè)35mm的培養(yǎng)皿中，用選擇培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)7天。此次富集培養(yǎng)是為日后的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)做準(zhǔn)備。

注意事項(xiàng)：
1. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
2. 嘌呤霉素為有毒化合物，操作時(shí)請小心拿放。

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