氨基磁珠(5μm,10mg/ml)由專業(yè)試劑供應商北京百奧萊博提供，僅用于生物化學研究方面，我公司專注于磁珠微球產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和供應，為您提供的氨基磁珠(5μm,10mg/ml)質量可靠，批間差小，且價格公道，熱切盼望您選購我們的產(chǎn)品。...

特別提示：包括氨基磁珠(5μm,10mg/ml)在內，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：氨基磁珠(5μm,10mg/ml)
產(chǎn)品貨號：CZ033
產(chǎn)品規(guī)格：5ml/50ml

產(chǎn)品簡介：
Mag NH2系列磁珠具有超順磁性、快速磁響應性、豐富氨基官能團、單分散性和亞微米尺度粒徑等特點，能夠在特殊化學試劑(如戊二醛)的作用下將多肽、蛋白、寡聚核苷酸等生物配體共價偶聯(lián)到微球表面，是醫(yī)學與分子生物學研究中重要的載體工具。
NH2系列磁珠采用的高分子聚合技術將超順磁性材料和高分子材料地結合在一起，形成的一種功能化磁性微球。與傳統(tǒng)磁珠相比，Magrose具有更快的磁響應性同時保持微球良好的分散性、低的非特異性吸附和更豐富的結合位點等特性，能便捷地與多種生物配體(蛋白、多肽、寡聚核苷酸、藥物分子等)進行高載量結合，可作為良好的基礎材料進行包被、吸附、化學改性等后續(xù)處理。
保質期：在2～8℃可穩(wěn)定保存，保質期2年
產(chǎn)品：
1. 豐富的結合位點，加強與配體的特異性結合。
2. 超順磁性和高磁響應性，節(jié)省操作時間。
3. 良好的分散性和重懸性，提高操作的便捷性。
4. 良好的物理化學穩(wěn)定性，保障重復性效果。
磁珠與生物分子的偶聯(lián)方法(參考，以蛋白A為例)：
1. 磁珠預處理：混勻磁珠后，取100 μL Mag / Magrose磁珠到1 mL EP管中，磁吸去除上清液，用200 μL PBS溶液(50 mM PBS，pH 7.4)洗滌3次，磁吸去上清；
2. 戊二醛活化：加入新鮮配制的100 μL戊二醛溶液(15%)到EP管中，漩渦混勻使磁珠充分懸浮，用錫箔紙包裹后25℃反應1 h(反應避光，以避免戊二醛自身發(fā)生聚合)，該期間保持磁珠的懸浮狀態(tài)(可利用垂直混合儀進行顛倒混勻)；
3. 活化后洗滌：磁珠活化后，磁吸去上清，用50 mM PBS，pH 7.4緩沖液洗滌3次；
4. 磁珠偶聯(lián)：向裝有磁珠的EP管中加入50 μg～200 μg生物配體(合適用量及濃度需要根據(jù)具體實驗進行優(yōu)化，保持溶液pH≈8.0，必要時可加入0.05% Tween -20以提高磁珠分散性)，輕柔地混
勻；用錫箔紙包裹(反應避光)后25℃偶聯(lián)3 h，或25℃偶聯(lián)1 h后放置4℃偶聯(lián)過夜，偶聯(lián)期間保持磁珠的懸浮狀態(tài)(可利用垂直混合儀進行顛倒混勻)；
注：由于戊二醛溶液在280 nm出有吸收峰，因此磁珠上偶聯(lián)蛋白的結合含量不能通過反應前后OD280值變化來計算，可通過BCA試劑盒或蛋白電泳法間接測量。
5. 偶聯(lián)后封閉：將EP管置于磁分離架上磁性分離去除上清液，加入200～1000 μL BSA/PBS溶液(pH 7.2，含5% BSA)重懸磁珠(可根據(jù)需要進行超聲)，25℃反應1 h封閉磁珠表面非特異性吸附位點，該期間保持磁珠的懸浮狀態(tài)(可利用垂直混合儀進行顛倒混勻)；
6. 保存：將EP管置于磁性分離架上磁性分離去除上清液，用200 μL PBS溶液(pH 7.2)或保存溶液洗滌3次后，重新懸浮于保存溶液中(可根據(jù)需要來確定保存溶液的加入量，以調整偶聯(lián)配體磁珠的濃度)，zuì后保存于4℃。必要時可以在保存溶液中加入0.02%(w/v) 疊氮化鈉(NaN3)抑制細菌生長。
注意事項：
1. 冷凍、干燥和離心等操作會引起磁珠團聚，不易于重懸和分散，并且影響磁珠表面功能基團的化學活性。
2. 在使用本產(chǎn)品前，請務必充分振蕩或超聲使磁珠保持均勻的懸浮狀態(tài)。
3. 使用過程中可根據(jù)需求，用純化水或緩沖液磁吸洗滌磁珠 2～3次，以去除保存液中乙醇。
4. 本產(chǎn)品需與磁性分離設備配套使用。
5. 為保證zuì佳的實驗結果，請選用合適的配體進行共價偶聯(lián)反應。
6. 本產(chǎn)品僅供研究使用。

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名稱：GST融合蛋白純化磁珠
貨號：CZ007
規(guī)格：5ml/2×50ml/4×250ml
產(chǎn)品簡介：
GST融合蛋白純化磁珠是專為、快速純化谷胱甘肽巰基轉移酶(GST)融合蛋白而設計的一種功能化材料，可通過磁性分離方式直接從生物樣品中一步純化出高純度的目標蛋白，大地簡化純化工藝和提高純化效率，適合科研和工業(yè)領域便捷地進行GST融合蛋白的純化。
與傳統(tǒng)的柱層析純化方式相比，采用磁珠純化GST融合蛋白，無需對粗蛋白樣品進行多次長時間的高速離心及濾膜過濾、無需控制流速、更不需要昂貴的層析設備。樣品與磁珠的特異性結合、洗滌及目標蛋白洗脫變得非常簡單、快速、易操作。對于熟練的操作者而言，在1 h內就能獲得高純度的目的蛋白，且能輕松實現(xiàn)高通量和大規(guī)模樣品的平行處理，為研究者節(jié)省了時間和成本。
適用范圍:
適用于谷胱甘肽巰基轉移酶(GST)融合蛋白、谷胱甘肽轉移酶以及與谷胱甘肽有親和作用的其它蛋白的分離純化。
操作流程:
目標蛋白與磁珠的結合性能將直接影響目標蛋白的純化效率，各種緩沖液配制也將在一定程度上影響目標蛋白的回收率和純度。因此，在較大規(guī)模蛋白純化之前，用戶應該自行設計實驗，篩選出適合目標蛋白的緩沖液，包括Binding /Washing Buffer(Buffer A)及Elution Buffer(Buffer B)。以下提供一個較強結合力的 GST標簽蛋白的純化流程，供用戶參考。
1.緩沖溶液配制
Buffer A：140 mM NaCl，2.7 mM KCl，10 mM Na2HPO4，1.8 mM KH2PO4，pH 7.4
Buffer B：50 mM Tris-HCl，10 mM還原型谷胱甘肽，pH 8.0配制方法：0.1 M Tris溶液 50 mL，0.307 g還原型谷胱甘肽，然后用0.1 M鹽酸調pH到8.0，加去離子水至100 mL。
注：1. 還原型谷胱甘肽容易被氧化，Buffer B要求現(xiàn)配現(xiàn)用；
2.不同的GST 融合蛋白與磁珠結合的強弱程度不同，對大部分的GST融合蛋白，使用含有10 mM還原性谷胱甘肽的Buffer B即可洗脫目標蛋白；對少數(shù)結合能力較強的GST融合蛋白，可以適當延長洗脫時間，增加洗脫次數(shù)，或提高Buffer B中還原型谷胱甘肽的濃度；
3. Buffer A和Buffer B中可以添加1～5 mM EDTA、1～10 mM DTT、0.1～1.0% Triton X-100、0.1～1.0% Tween 20等，以提高目標蛋白的穩(wěn)定性。
2. 樣品處理
本說明書提供以下三種樣品的處理方法：
(1)大腸桿菌、酵母等細胞內表達蛋白：表達細胞用適量Buffer A稀釋，加入蛋白酶抑制劑(如終濃度為 1 mM的PMSF)；冰浴超聲裂解細胞，即為粗蛋白樣品。如果樣品過于粘稠，可根據(jù)需要在粗樣品中加入適量核酸酶，在冰上放置30 min，以降解核酸。另外，如果目標蛋白含量較低，建議將粗蛋白樣品進行離心操作。
(2)胞外表達蛋白：取胞外表達上清，用等量Buffer A稀釋平衡，即為粗蛋白樣品。
(3)動物細胞胞內表達蛋白：取適量動物細胞，用適量PBS洗滌1次，棄上清；用適量含1%(v/v)Triton X-100或1%(v/v)NP-40的Buffer A重懸；加入蛋白酶抑制劑(如終濃度為1 mM的PMSF)；置于冰上10 min，即為粗蛋白樣品。
3.磁珠預處理
一般情況下，磁珠的使用量是由用戶根據(jù)目標蛋白產(chǎn)量和磁珠載量信息計算獲得。例如：采用大腸桿菌表達某目標蛋白，250 mL發(fā)酵液收獲1 g濕重的菌體，通過預實驗估算其目標蛋白產(chǎn)量為5～10 mg，用戶需要取10 mL 10%的磁珠懸液用于目標蛋白的純化。以下即以此為例進行詳細說明：
(1)將磁珠產(chǎn)品置于漩渦混勻器上充分混勻，用移液器取10 mL磁珠懸液于離心管中；
(2)將離心管置于磁性分離器上，待溶液變澄清后，移去上清液；
(3)加入5～10 mL Buffer A到上述裝有磁珠的離心管中，蓋緊蓋子，漩渦振蕩15 s，使磁珠重新懸浮。將離心管置于磁性分離器上，磁性分離＊，移去上清液，重復洗滌2次。
(*注：在磁性分離過程中，為了減少磁珠在使用過程中的損耗，待溶液變澄清后，蓋緊離心管蓋子，保持離心管仍在磁性分離器上，手持磁性分離器與離心管上下翻轉數(shù)次，使澄清的溶液涮洗離心管蓋上殘留的磁珠，靜置片刻，使溶液重新變澄清；以下同。)
4.目標蛋白與磁珠結合
(1)用10 mL Buffer A懸浮1 g濕重的菌體，進行破碎和裂解后，即為粗蛋白樣品；
(2)將粗蛋白樣品加入到裝有預處理磁珠的離心管中，蓋緊離心管蓋；
(3)將離心管置于漩渦混勻器振蕩15 s，然后置于旋轉混合儀上，室溫旋轉混合20～30 min(如果需要，可在2～8℃的低溫環(huán)境下旋轉混合約1 h，防止目標蛋白降解)；
(4)將離心管置于磁性分離器上進行磁性分離，移出上清液到新的離心管中以備后續(xù)檢測。從磁性分離器上取下離心管進行后續(xù)洗滌步驟。
5. 磁珠洗滌
(1)加入5～10 mL Buffer A到裝有磁珠的離心管中，旋轉混合2 min，磁性分離，移出清洗液到新的離心管中，以備取樣檢測；
(2)加入5～10 mL Buffer A到裝有磁珠的離心管，使磁珠重新懸浮，將磁珠懸液轉移至新的離心管，避免原離心管壁上非特異性吸附蛋白污染目標蛋白；磁性分離，移出上清液到清洗液收集管。
6.目標蛋白洗脫
(1)加入2～5 mL Buffer B(用戶可根據(jù)需要改變洗脫體積調整目標蛋白濃度)于離心管中，蓋緊離心管蓋，然后將離心管置于旋轉混合儀上，室溫旋轉混合2 min；磁性分離，收集洗脫液到新的離心管中，即為純化的目標蛋白樣品；
(2)如果需要，可以重復上述步驟1次，收集樣品到新的離心管中，以檢測目標蛋白是否洗脫完全。
7.磁珠清洗和保存
磁珠使用后經(jīng)過簡單清洗處理后，可以繼續(xù)用于后續(xù)的純化操作，也可以長時間保存。用戶可根據(jù)磁珠使用的情況選擇不同的清洗方法，主要有以下幾種情況：
情況1：重復使用次數(shù)較少，結合能力下降不明顯時，可以采用高pH和低pH buffer交替洗滌的方式進行清洗
(1)高pH洗(堿洗)：使用后的磁珠加入10 mL Buffer C(即0.1 M Tris-HCl，0.5 M NaCl，pH 8.5)，漩渦振蕩60 s，磁性分離，去除上清液—；
(2)低pH洗(酸洗)加入10 mL Buffer D(即0.1 M 醋酸鈉，0.5 M NaCl，pH 4.5)，漩渦振蕩60 s，磁性分離，去除上清液；
(3)重復堿洗、酸洗交替清洗2次，共3次。
情況2： 重復使用次數(shù)較多時，由于沉淀、變性或非特異性吸附蛋白積累，導致磁珠結合目標蛋白的能力明顯下降。去除沉淀或變性蛋白，可按下面的方法進行洗滌：
(1)先用5 mL 6 M鹽酸胍洗滌2次，每次漩渦振蕩60 s，磁性分離，去除上清液；
(2)再用10 mL 1×PBS洗滌3次，每次漩渦振蕩60 s，磁性分離，去除上清液。
情況3：去除疏水性結合物質，可按下面的方法進行洗滌：
(1)先用5 mL 70%乙醇或濃度為0.1%的非離子型表面活性劑洗滌3次，每次漩渦振蕩60 s，磁性分離，去除上清液；
(2)再用10 mL 1×PBS洗滌3次，每次漩渦振蕩60 s，磁性分離，去除上清液。
注：完成情況1或情況2的清洗操作后，如果用戶需要繼續(xù)使用磁珠用于蛋白純化，需先用Buffer A洗滌2～3次。 如果不需要繼續(xù)使用，則用20%乙醇洗滌磁珠2～3次后，再加入20%(v/v)乙醇到磁珠中使總體積為10 mL，保存于2～8°C。
蛋白純化流程的優(yōu)化：
以上操作流程適用于大部分GST融合蛋白的純化，根據(jù)目標蛋白與GST融合蛋白純化磁珠的結合性能不同，用戶可以從以下幾個方面對純化流程進行優(yōu)化，以提高目標蛋白的回收率和純度。
1. 提高目標蛋白回收率的參考方法：
(1)延長蛋白溶液與磁珠孵育的時間；
(2)樣品及緩沖液中加入1～10 mM的DTT，有助于提高部分GST融合蛋白與磁珠的結合；
(3)添加合適的蛋白酶抑制劑，防止目標蛋白降解；
(4)增加磁珠用量；
(5)延長洗脫目標蛋白的時間或增加洗脫次數(shù)；
(6)使用新鮮配制的Buffer B保證目標蛋白洗脫效率。
2. 提高目標蛋白純度的參考方法：
(1)避免劇烈的超聲破碎造成GST標簽與目標蛋白發(fā)生斷裂；
(2)在純化過程中添加合適的蛋白酶抑制劑，防止目標蛋白降解；
(3)在樣品溶液和緩沖液中加入 0.1%的Tween20或2% 的NP-40可降低非特異蛋白的吸附；
(4)延長洗滌時間，增加洗滌次數(shù)；
(5)采用梯度濃度還原型谷胱甘肽洗脫目標蛋白。
注意事項：
(1)次使用本產(chǎn)品前，請務必詳細閱讀本用戶手冊；
(2)磁珠使用和保存過程中應避免冷凍、干燥和高速離心等操作；
(3)在使用本產(chǎn)品前，請務必充分振蕩使磁珠保持均勻的懸浮狀態(tài)；
(4)請選用質量好的移液器吸頭和離心管，以免磁珠貼壁或混合過程發(fā)生滲漏引起磁珠的損耗；
(5)磁珠與溶液混合過程中，如果溶液粘稠無法通過翻轉離心管重懸磁珠，可采用移液器反復吹吸或短時漩渦混合使磁珠充分重懸；
(6)用戶可根據(jù)實際需要保留經(jīng)磁性分離移去的上清液，進行取樣檢測，以便分析純化過程和優(yōu)化蛋白純化流程；
(7)本產(chǎn)品可以重復使用，重復使用時，建議純化同種蛋白，純化不同種類的蛋白時，建議使用新的磁珠，以防交叉污染；
(8)本產(chǎn)品需與磁性分離器配套使用；
(9)本產(chǎn)品僅供研究使用。

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