北京百奧萊博供應(yīng)的Ad-mCherry-GFP-LC3B用于科研目的，本品質(zhì)量穩(wěn)定，價位合理，需要Ad-mCherry-GFP-LC3B等細(xì)胞凋亡與增殖產(chǎn)品的客戶，請到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。...

特別提示：包括Ad-mCherry-GFP-LC3B在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：Ad-mCherry-GFP-LC3B
英文名稱：adenovirus expressing mCherry-GFP-LC3B fusion protein
產(chǎn)品貨號：YT160
產(chǎn)品規(guī)格：1ml|10×1ml

本品是一種可以表達(dá)mCherry-GFP-LC3B融合蛋白的腺病毒，可以用于感染細(xì)胞或組織后進(jìn)行細(xì)胞自噬的檢測。

LC3是酵母自噬關(guān)鍵蛋白ATG8在哺乳動物中的同源蛋白。LC3zuì初被分析鑒定為microtubule-associated protein 1 light chain 3。LC3蛋白家族包括LC3A、B、C和GABARAP等亞家族，其中對于LC3B的研究zuì為廣泛。到目前為止，LC3B被認(rèn)為是細(xì)胞自噬信號通路zuì為關(guān)鍵的標(biāo)志性蛋白。LC3B是一個具有125個氨基酸殘基的蛋白，在蛋白合成后，被Atg4所酶切而失去了C端的22個氨基酸蛋白，從而暴露出C端的甘氨酸，人們把它命名為胞質(zhì)形式的LC3B I。在細(xì)胞自噬的過程中，其C端暴露的甘氨酸經(jīng)過一個類似泛素化的過程，以ATG7為E1樣激活酶， 以ATG3為E2樣連接酶，以Atg12-Atg5-Atg16復(fù)合物為E3樣連接酶，在C端甘氨酸上共價連接上磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine,PE)而成為LC3B-PE即LC3B II。與胞質(zhì)定位的LC3B I不同，LC3B II定位于自噬體的內(nèi)膜和外膜上。在自噬體與溶酶體融合后，自噬體外膜上的LC3B II被Atg4所酶切，而自噬體內(nèi)膜上的LC3B II則被溶酶體內(nèi)的蛋白酶所降解。盡管LC3B II比LC3B I的分子量要大，但由于其強(qiáng)的疏水性，在SDS-PAGE電泳時，LC3B II比LC3B I遷移得更快，其表觀分子量分別為14kD和16kD。在用GFP-LC3B腺病毒感染細(xì)胞后，在非自噬的情況下，熒光顯微鏡下GFP-LC3B以彌散的形式存在于細(xì)胞質(zhì)中；而在自噬的情況下，熒光顯微鏡下GFP-LC3B則聚集在自噬體膜上，以斑點(diǎn)的形式表現(xiàn)出來。

自噬是一種在進(jìn)化上高度保守的通過溶酶體吞噬并降解部分自身組分的細(xì)胞內(nèi)分解代謝途徑。自噬與多種生理功能有關(guān)，在饑餓等不利的環(huán)境條件下， 細(xì)胞通過自噬降解多余或異常的細(xì)胞內(nèi)組分，為細(xì)胞的生存提供能量及原材料，促進(jìn)生物體的生長發(fā)育、細(xì)胞分化及對環(huán)境變化產(chǎn)生應(yīng)答。自噬異常與多種病理過程如腫瘤、神經(jīng)退行性疾病、代謝疾病、病原體感染等都有密切關(guān)系。由于細(xì)胞自噬在生理和病理過程中都有重要作用，自噬已經(jīng)成為細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域的一個新的研究熱點(diǎn)。

Ad-mCherry-GFP-LC3B是百奧萊博的重組腺病毒，感染后能夠在靶細(xì)胞中有效表達(dá)紅色熒光蛋白mCherry、綠色熒光蛋白(GFP)和LC3B的融合蛋白，呈現(xiàn)明亮的紅色和綠色熒光，可以用于細(xì)胞自噬的檢測。

自噬小體在與溶酶體融合過程中，溶酶體內(nèi)的酸性環(huán)境會導(dǎo)致GFP熒光淬滅，這為追蹤GFP-LC3B的細(xì)胞定位增加了難度。mCherry是一種來自于蘑菇珊瑚(mushroom coral)的單體紅色熒光蛋白，當(dāng)其與GFP進(jìn)行LC3B的共同標(biāo)記時，在GFP被溶酶體酸性環(huán)境所淬滅的情況下，可以發(fā)出紅色熒光的mCherry因?yàn)槠涞姆€(wěn)定性而被保留。因此，通過融合表達(dá)mCherry-GFP-LC3B蛋白，可以非常有效地追蹤自噬過程。在用Ad-mCherry-GFP-LC3B腺病毒感染細(xì)胞后，在非自噬的情況下，熒光顯微鏡下mCherry-GFP-LC3B以彌散的黃色熒光(mCherry和GFP的綜合效果)形式存在于細(xì)胞質(zhì)中；而在自噬的情況下，熒光顯微鏡下mCherry-GFP-LC3B則聚集在自噬體膜上，以黃色斑點(diǎn)的形式表現(xiàn)出來(LC3B dot or punctae)；當(dāng)自噬體與溶酶體融合后，因GFP熒光的部分淬滅而以紅色斑點(diǎn)的形式表現(xiàn)出來。

腺病毒感染細(xì)胞后為瞬時表達(dá)，通常不會與基因組DNA重組，不能用于篩選穩(wěn)定細(xì)胞株。本產(chǎn)品感染體內(nèi)外細(xì)胞后，有效表達(dá)時間通常不少于7天，不同細(xì)胞和組織的有效表達(dá)時間有所不同。感染10-14天后融合蛋白的表達(dá)很可能會大大減弱。

百奧萊博的Ad-mCherry-GFP-LC3B采用了成熟的E1缺陷型重組腺病毒載體系統(tǒng)，感染普通的細(xì)胞后不能進(jìn)行擴(kuò)增和重組，從而可以有效降低本產(chǎn)品在活體生物中的風(fēng)險。

本產(chǎn)品可以在表達(dá)E1的HEK293A、HEK293等適當(dāng)細(xì)胞中擴(kuò)增。

本產(chǎn)品的滴度≥1×108 pfu/ml，使用時可以按照108pfu/ml進(jìn)行計算。如果按照20 MOI感染6孔板的細(xì)胞，每孔50萬細(xì)胞計算，共可以感染10個孔；如果按照20 MOI感染24孔板的細(xì)胞，每孔10萬細(xì)胞計算，共可以感染50個孔。如果MOI值提高，則相應(yīng)可以感染的孔數(shù)會減少；如果MOI值降低，則相應(yīng)可以感染的孔數(shù)會增加。

注意事項(xiàng)：
1. 反復(fù)凍融會降低病毒滴度，如有必要請在收到本產(chǎn)品后分裝保存。病毒融解后，如果在一周內(nèi)使用，可以放置于4℃。如果-80℃保存時間超過一年，可能會導(dǎo)致滴度下降，此時建議重新測定病毒滴度。
2. 腺病毒感染需要細(xì)胞表面的CAR受體，請確認(rèn)擬使用的細(xì)胞或組織可以被腺病毒感染。
3. 本產(chǎn)品使用前請仔細(xì)閱讀附錄1《腺病毒使用安全規(guī)范》。本產(chǎn)品生物安全等級為Biosafety Level 1 (BSL-1)，沒有確鑿證據(jù)顯示會導(dǎo)致健康成人產(chǎn)生疾病，可以按照常規(guī)的微生物實(shí)驗(yàn)操作要求進(jìn)行操作。

儲存條件：-20℃，有效期1～2個月。

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名稱：Annexin V-EGFP細(xì)胞凋亡檢測試劑盒
貨號：YT133
規(guī)格：20次|50次
本試劑盒是用EGFP標(biāo)記的重組人Annexin V來檢測細(xì)胞凋亡時出現(xiàn)在細(xì)胞膜表面的磷酯酰絲氨酸的一種細(xì)胞凋亡檢測試劑盒。一個包裝的本試劑盒共可以檢測20個樣品。可以使用流式細(xì)胞儀、熒光顯微鏡或其它熒光檢測設(shè)備進(jìn)行檢測。

試劑盒組份：
Annexin V-EGFP—————————100μl
Annexin V-EGFP結(jié)合液——————12ml
碘化丙啶染色液—————————220μl

Annexin是一類廣泛分布于真核細(xì)胞細(xì)胞漿內(nèi)鈣離子依賴的磷酯結(jié)合蛋白，參與細(xì)胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。但僅Annexin V被報道可以調(diào)控一些PKC的活性。

Annexin V選擇性結(jié)合磷酯酰絲氨酸(phosphatidylserine，簡稱PS)。磷酯酰絲氨酸主要分布在細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)，即與細(xì)胞漿相鄰的一側(cè)。在細(xì)胞發(fā)生凋亡的早期，不同類型的細(xì)胞都會把磷酯酰絲氨酸外翻到細(xì)胞表面，即細(xì)胞膜外側(cè)。磷酯酰絲氨酸暴露到細(xì)胞表面后會促進(jìn)凝血和炎癥反應(yīng)。而Annexin V和外翻到細(xì)胞表面的磷酯酰絲氨酸結(jié)合后可以阻斷磷酯酰絲氨酸的促凝血和促炎癥反應(yīng)活性。

用帶有綠色熒光的熒光探針EGFP標(biāo)記的Annexin V，即Annexin V-EGFP，就可以用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡非常簡單而直接地檢測到磷酯酰絲氨酸的外翻這一細(xì)胞凋亡的重要特征。

本試劑盒還提供了碘化丙啶染色液，碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)可以染色壞死細(xì)胞或凋亡晚期喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，呈現(xiàn)紅色熒光。對于壞死細(xì)胞，由于細(xì)胞膜的完整性已經(jīng)喪失，Annexin V-EGFP可以進(jìn)入到細(xì)胞漿內(nèi)，與位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)的磷酯酰絲氨酸結(jié)合，從而也使壞死細(xì)胞呈現(xiàn)綠色熒光。

綜上所述，用Annexin V-EGFP和碘化丙啶染色后，正常的活細(xì)胞不被Annexin V-EGFP和碘化丙啶染色；凋亡早期的細(xì)胞僅被Annexin V-EGFP染色，碘化丙啶染色呈陰性；壞死細(xì)胞和凋亡晚期的細(xì)胞可以同時被Annexin V-EGFP和碘化丙啶染色。

注意事項(xiàng)：
1. 如果有細(xì)菌或真菌污染，會嚴(yán)重影響檢測效果。
2. 染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
3. 如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-EGFP，zuì終導(dǎo)致染色失敗。
4. 熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。

儲存條件：4℃避光，有效期6個月。

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貨號	名稱	規(guī)格
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YT160	Ad-mCherry-GFP-LC3B	1ml|10×1ml
SNM530	Annexin V-FITC/PI雙染 細(xì)胞凋亡檢測試劑盒	50T|20T|10T
SNM531	TUNEL細(xì)胞凋亡原位檢測試劑盒(熒光及顯色法，細(xì)胞樣本)	50T|20T
KFS211	羅丹明123染色試劑盒	100T
SY0471	細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(Annexin V-FITC/PI)	20T|50T|100T

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